乳腺癌细胞中人血小板衍生生长因子受体启动子的基础活性研究.pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１１，３１（４）：１８２４ 乳腺癌细胞中人血小板衍生生长因子受体 β启动子的基础活性研究 谢秋玲　卢　加　刘　兰　张传宇　郭欣泳　彭雯丹　陈小佳 （暨南大学生命科学技术学院广东省生物工程药物重点实验室　广州　５１０６３２） 摘要　目的：探讨低迁移表型的乳腺癌细胞ＭＣＦ７和高迁移表型的乳腺癌细胞ＭＤＡＭＢ２３１中 血小板衍生生长因子 启动子的基础活性及转录调控差异。方法：ＲｅａｌＴｉｍｅＰＣＲ，Ｗｅａｓｔｅｒｎｂｌｏｔ β 等技术检测ＰＤＧＦＲ 在２株细胞中的转录和表达差异。双荧光报告系统检测ＰＤＧＦＲ 启动子各 β β 缺失突变片段在２株细胞中的活性，筛选差异片段。生物信息学预测启动子区可能存在的转录因 子。凝胶迁移实验研究转录因子在两株乳腺癌细胞中对ＰＤＧＦＲ 启动子的调节活性。结果：两 β 株细胞中都有ＰＤＧＦＲ 的内源性表达，且在 ＭＤＡＭＢ２３１中表达较高。在２株细胞中找到了人 β ＰＤＧＦＲＢ启动子的重要活性调节区，（＋５３９ｂｐ，＋１４５７ｂｐ）在２株细胞中均呈负调控，（＋５４ｂｐ，＋ ５３９ｂｐ）在两株细胞中均呈正调控，（９８３ｂｐ，＋５４ｂｐ）在 ＭＤＡＭＢ２３１中呈显著正调控，在 ＭＣＦ７ 中没有活性。转录因子ＡＰ１的转录活性和与ＤＮＡ的结合活性在ＭＤＡＭＢ２３１中均高于ＭＣＦ７。 结论：不同迁移表型的乳腺癌细胞中ＰＤＧＦＲ 存在不同的表达调控机制，ＰＤＧＦＲ 启动子活性片 β β 段（９８３ｂｐ，＋５４ｂｐ）在两株细胞中存在显著活性差异。转录因子ＡＰ１在两株细胞中有表达水平 和结合活性差异。 关键词　ＰＤＧＦＲ ｐｒｏｍｏｔｅｒ　人乳腺癌细胞ＭＣＦ７　ＭＤＡＭＢ２３１　迁移　ＡＰ１ β 中图分类号　Ｑ７８ ２＋ 　　人血小板衍生生长因子受体 （ｐｌａｔｅｌｅｔｄｅｒｉｖｅｄ 起一系列的细胞反应。如动员钙库中Ｃａ 的释放，胞 ｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｅｒ，ＰＤＧＦＲ）广泛分布于人体组织，如 内ｐＨ值上升，原癌基因激活，从而促进细胞有丝分裂， 平滑肌细胞 ＳＭＣ、成纤维细胞、内皮细胞、神经胶质细 ＤＮＡ合成及血管收缩等。 胞、软骨细胞等，是含Ｎ乙酰氨基葡萄糖和半乳糖残基 　　ＰＤＧＦ和ＰＤＧＦＲ涉及多种肿瘤的发病机制并在血 ［１］ 的单链膜糖蛋白，分子量约１８０ｋＤａ 。根据其功能分 管生成中起重要作用。ＰＤＧＦＲ 在正常生理条件下为 β 为胞外配体结合区、跨膜区、胞内近膜区和膜内区。细 低表达或不表达，在肿瘤细胞的胞浆胞膜或肿瘤组织 胞外配基结合区含５个免疫球蛋白样结构域，具保守 ［３５］ 的间质细胞往往高表达 。大多数的肿瘤细胞既表 的半胱氨酸残基，单一跨膜片段，膜内区包含酪氨酸蛋 达ＰＤＧＦ又表达ＰＤＧＦＲ，且ＰＤＧＦ／ＰＤＧＦＲ自分泌调节 ［２］ 白激酶区，是酪氨酸激酶受体家族的一员 。成熟的