真菌常用的体外药敏试验方法比较.ppt

关于真菌常用的体外药敏试验方法比较真菌药敏试验临床难以开展的原因1.按照NCCLS推荐的稀释法,操作繁琐2.有些药只能用于某种菌的抗菌活性测定3.纸片法试验未得到NCCLS认可4.E试验价钱太贵5.药敏孵育时间因菌种而不同第2页,共27页，2024年2月25日，星期天体外敏感试验与临床治疗相关性真菌体外药敏试验结果与口咽部真菌感染结果相关性好对于深部的真菌感染，抗真菌药物敏感性试验同临床治疗的相关性还有待进一步证实体外敏感试验没有考虑到真菌对抗真菌药物在体内的动力学和复杂的生物学作用第3页,共27页，2024年2月25日，星期天真菌体外药物敏感试验方法NCCLSM27-A：常量肉汤稀释法，微量肉汤稀释法E-test法NCCLSM44-P纸片扩散法(仅限氟康唑)丹麦Rosco纸片扩散法(NCCLS未认可)第4页,共27页，2024年2月25日，星期天真菌体外药敏用培养基常量肉汤和微量肉汤法RPMI1640液制备： RPMI 10.4g MOPS（三氮吗啡啉丙磺酸） 34.53g 蒸馏水900ml溶解后，用1MNaOH调节PH至7.0（25℃），用蒸馏水溶至1000ml，高压灭菌后，冷却至50℃加入RPMI1640用0.22μm滤膜抽滤除菌，4℃保存。第5页,共27页，2024年2月25日，星期天真菌体外药敏用培养基E-test法：在RPMI液体培养基中补充葡萄糖，使其终浓度为2%。NCCLS纸片扩散法：Mueller-Hinton琼脂补充2%葡萄糖和0.5μg/ml美蓝丹麦ROSCO纸片扩散法：改良的SHADOMY（PH7.0）培养基主要成分：酵母粉，葡萄糖，天冬氨酸，磷酸缓冲液等。第6页,共27页，2024年2月25日，星期天菌液制备将受试菌在沙保罗培养基上转种，以保证其纯度和活性。用0.85%的盐水制成酵母菌悬液，调整其浊度达到0.5麦氏比浊标准（约为1~5×106CFU/ml）。常量稀释法：用RPMI1640液体稀释2000倍 接种浓度约为0.5~2.5×103CFU/ml微量稀释法：用RPMI1640液体稀释1000倍接种浓度约为1～5×103CFU/mlE-test法和NCCLS纸片扩散法：用菌液浊度为0.5麦氏单位。Rosco纸片扩散法：1.念珠菌： 0.5麦氏浊度，生理盐水1：10稀(1~5×105CFU/ml)2.隐球菌属： 1.0麦氏浊度3.其它酵母菌：0.5麦氏浊度，生理盐水1：1稀释第7页,共27页，2024年2月25日，星期天常量肉汤法(M27-A)先将氟康唑粉末溶于蒸馏水，然后用配制好的RPMI1640液倍比稀释，使其起始浓度为640μg/ml,终末浓度为1.25μg/ml，分装无菌洁净的12mm×75mm试管：64321684210.5.25.125＋－前10管：0.2ml氟康唑＋1.8ml菌液念珠菌属35℃孵育48小时新型隐球菌72小时读取MIC结果2ml菌液1.8ml1640第8页,共27页，2024年2月25日，星期天常量稀释法

药敏结果判定氟康唑，伊曲康唑，两性霉素为100%抑制其他唑类药物为80%抑制（取0.2ml的生长对照菌液加入0.8mlRPMI液体培养基的菌液浓度）质控株克柔念珠菌ATCC6258 近平滑念珠菌ATCC22019白念珠菌ATCC90028 白念珠菌ATCC24433第9页,共27页，2024年2月25日，星期天微量肉汤法氟康唑的稀释方法同常量法，但起始浓度为2×常量法的浓度（即128μg/ml），终浓度为0.25μg/ml。。37℃。37℃6432168421.5.25.12