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p-糖蛋白在人白血病多药耐药细胞株K562A02线粒体上表达的研究的开题报告

【开题报告】

一、选题背景及研究意义

多药耐药是白血病治疗中一个普遍存在的问题，当前临床上使用的大多数抗肿瘤药物都存在多药耐药的现象，这就给临床治疗带来了很大的挑战。因此，研究白血病多药耐药的分子机制已成为当前研究的热点问题之一。

P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）是一种跨膜输运蛋白，能够将多种化合物从内部输送到细胞外，包括许多抗癌药物。P-糖蛋白在多药耐药的癌细胞中高度表达，已成为临床上诊断多药耐药的主要指标。因此，研究P-糖蛋白在多药耐药白血病细胞中的表达和其对癌细胞的作用机制更加具有现实意义。

线粒体是细胞内储能和凋亡的重要场所，多药耐药癌细胞的线粒体功能异常是引起化疗患者治疗失败的一个主要因素。因此，研究P-糖蛋白在白血病多药耐药细胞株K562A02线粒体上的表达及其对线粒体功能的影响将有助于深入了解多药耐药的分子机制。

二、研究目的

本研究旨在探讨P-糖蛋白在人白血病多药耐药细胞株K562A02线粒体上的表达情况以及其对线粒体功能的影响，为临床治疗多药耐药白血病提供新的治疗策略。

三、研究内容与方法

1、建立人白血病多药耐药细胞株K562A02模型

将K562细胞株连续压制5-20次，筛选出具有多药耐药性的细胞株作为实验材料。

2、检测K562A02细胞株P-糖蛋白表达情况及线粒体功能

Westernblot和RT-qPCR方法检测K562A02细胞株P-糖蛋白的表达水平；采用荧光探针，检测K562A02细胞株线粒体功能如膜电位、呼吸、自由基等参数的变化。

3、通过基因克隆技术构建P-糖蛋白过表达和沉默的K562A02细胞株

采用基因克隆技术将P-糖蛋白基因克隆至真核表达质粒，转染至K562A02细胞株中，通过Westernblot检测P-糖蛋白的表达情况。利用siRNA技术对P-糖蛋白进行沉默，通过Westernblot及RT-qPCR检测P-糖蛋白的表达水平。

4、检测P-糖蛋白对K562A02细胞线粒体功能的影响

将P-糖蛋白过表达和沉默细胞比较线粒体功能的差异，通过荧光探针等技术检测线粒体膜电位、ATP含量、自由基水平、ROS含量等指标的变化。

四、预期结果

本研究将揭示P-糖蛋白在人白血病多药耐药细胞株K562A02线粒体上的表达情况以及其对线粒体功能的影响，为临床多药耐药白血病的治疗提供新的思路和策略。