《植物细胞组织培养》实验指导.docx
KLC洁净工作台
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T
植物细胞组织培养技术
实验指导书
中国计量学院生命科学学院二零零六年七月
《植物细胞组织培养》实验指导
目 录
实验一、植物组织培养培养基母液的配制实验二、植物组织培养的培养基配制
实验三、康乃馨的离体快繁
实验四、胡萝卜愈伤组织的建立实验五、组织培养物的继代培养
实验一 组织培养基母液的配制
一、仪器及药品
冰箱、天平（0.0001g）
容量瓶:1000ml,500ml、250ml、100ml、25ml
广口储液瓶：500ml、250ml、50ml、25ml
烧杯：1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml
数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺或挖耳勺
标签纸、胶水、50%酒精、95%酒精、1mol/L盐酸、1mol/LNaOH
几种常用的培养基所需的大量元素、微量元素、有机物、激素、铁盐等药品
蒸馏水
二、方法和步骤：
按照培养基配方,把大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素分
类,每一类中各种药品分别称量,如N
培养基各种母液的配制步骤如下：
6
大量元素母液：包括用量较大的几种化合物〈见N
6
培养基配方〉，按表中
排列顺序,将每种药品的用量扩大10倍，分别称取，分别溶解，然后按照顺序混合在一起。如钙盐等易发生沉淀的药品不能混合，应单位定容，最后加上蒸馏水，定容至1升或500毫升。在定容时注意用蒸馏水洗净烧杯和玻璃搅棒以减少误差。定容后的溶液为大量元素母液，配制培养基时，每配1L培养基需吸取该母液l00ml或50ml。
微量元素母液：因用量少，为了称量精确和方便,常配成100倍或1000倍的母液，即每种药品扩大l00倍或者l000倍。逐个溶解，混合在一起成为微量元素母液，每配1LN6培养基需吸取该母液10ml或者1ml。
铁盐：在N6培养基中需要单独配制，它是由硫酸亚铁（FeSO4?7H2O）2.78g
和乙二氨四乙酸二钠（Na2-EDTA）3.73g，分别溶解，混合后，用酒精灯加热半小时以上，冷却后定容至1L。冰箱过夜贮藏无结晶析出，否则重新配制。每
配l升N6培养基需加该铁盐母液5ml。
有机物质：主要指氨基酸，维生素类物质。它们大都是扩大1000倍，分别称量，分别定容和储存，配制培养基时按需要的量加入。
植物激素：常用的有生长素类如：2,4-D、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）、吲哚丁酸（IBA）；细胞分裂素类：激动素（KT）、6-苄基氨基嘌呤（6-BA）、玉米素（ZT）。配制时需要单个称量，根据需要可分别用酸、碱或酒精等不同的溶剂溶解后,再用蒸馏水配制成所需的浓度，一般为每ml含0.1-2mg，配制培养基时按所需要的量分别加入，本实验中的2,4-D和6-BA均配成1mg/ml的母液。
表1药品名N6朱至清(1975)培养基配方配方量(mg/L)463母液倍数(NH)SO42 4称取量(g/L)
表1
药品名
N
6
朱至清(1975)培养基配方
配方量(mg/L)
463
母液倍数
(NH)SO
42 4
称取量(g/L)
4.63
KNO
3
2830
28.3
CaCl·2HO
大量元素
166
10×
1.66
2 2
MgSO·7HO
4 2
KHPO
185
400
1.85
4.0
2 4
Na-EDTA
2
铁盐
37.3
100×
3.73
FeSO·7HO
4 2
27.8
2.78
MnSO·4HO
4 2
4.0
4.0
ZnSO·7HO
4 2
微量元素
3.8
1000×
3.8
HBO
1.6
1.6
3 3KI0.80.8盐酸硫胺素11.0(VB)
3 3
KI
0.8
0.8
盐酸硫胺素
1
1.0
(VB)
1
烟酸
有机物质
0.5
1000×
0.5
盐酸吡哆醇
0.5
0.5
(VB)
6
甘氨酸
2.0
2.0
三、注意事项
如药品所带结晶水不同，应进行换算。
因常用的MS培养基中硝酸铵(NHNO)属于公安部门严格限制管理的药品，
4 3
所以本实验采用N培养基替代MS培养基。
6
实验二培养基的配制
一、仪器设备及试剂电炉
天平（0.0001g）
高压灭菌锅
量筒：l0ml、20ml、100ml、500ml
烧杯：1000ml、500ml、250ml
移液管：1ml、2ml、5ml
吸管若干、记号笔
三角瓶或试管、试管架锡铂纸、玻璃棒
配制好的各种母液，如大量元素母液、微量元素母液、铁盐、有机物、生长调节剂等