聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子的制备及在猪肝细胞培养中的应用.pdf

32· 第十九届全国肝胆胰外科学术交流会资料汇编 术者丰富的手术经验，无需术中超声，依然可以准确无误的切取单段供肝。正如Santibanes的经验， 目前京都大学移植组也认为在获取单段供肝时，并没有必要照搬解剖学上的单段定义，而应该根据估 计的受体腹腔容积，充分考虑保留入肝和出肝通道的前提下，切除外周多余的肝组织，从而获得一个 近乎方形的功能性肝块来作为供肝，而这种方形的功能性肝块仍被认为是单段移植肝。 京都大学这种单段活体肝移植术后1年的生存率是80％，这样的存活率完全可以和京都大学506 例儿童活体肝移植的82．4％的存活率相媲美。然而，单段活体肝移植的血管并发症发生率为20％，似 乎不是令人很满意。尽管这种高发生率随着病例数的增加和经验的积累呈现出一个下降的趋势。、实际 上，从解剖的角度来看，并不难理解这种由于供受双方动脉口径不匹配而导致的动脉血栓形成乃至移 植肝无功能的高发生率。不过有理由相信，随着经验的积累和手术技巧的不断提高，血管并发症发生 率会进一步下降。 单段活体肝移植的发展扩展了新生儿和小婴儿的活体肝移植的供体来源，毫无疑问是肝移植领 域的又一可喜的进步。尽管这一技术仅适用于体重lOkg的小婴儿，也正因如此其今后的发展速度受到 限制，但还是有理由相信这一技术会为更多的儿童带来希望…。 聚乳酸．0．羧甲基壳聚糖纳米粒子的制备及其在猪肝细胞培养中的应用 南通大学附属医院肝胆外科，江苏南通(226001) 陈钟 戴新征杨欣荣祝文彩 摘要：以聚乳酸和O一羧甲基壳聚糖为基质材料，采用超声波法制备了聚乳酸-0-羧甲基壳聚糖纳米粒 子，用原子力显微镜对其进行了物理表征，用X射线光电子光谱法对其表面的化学结构进行了表征。 用聚乳酸一O一羧甲基壳聚糖纳米粒子进行原代猪肝细胞培养，并以普通培养作为对照组。观察培养后一 周内肝细胞的形态和功能变化。结果表明：所形成的聚合物经原子力显微镜和x射线光电子光谱法证 实为聚乳酸一O一羧甲基壳聚糖纳米粒子，该纳米粒子可以促进肝细胞形成球形聚集体，在该纳米粒子上 培养的肝细胞保持良好的形态和功能。 关键词：聚乳酸-0-羧甲基壳聚糖；纳米材料：肝细胞培养；肝细胞移植 急性肝衰竭(Acute 移植可以起到一定的肝功能支持作用。由于其具有操作简单、对机体生理环境干扰小、供体来源广泛 等优点，已引起了众多研究者的广泛关注【l。】。然而，如何提高移植肝细胞的活性和降低免疫排斥反应 是急需解决的两大问题。纳米材料因其结构特点，可促进肝细胞的生长[41。为此，我们制备了聚乳酸．0． 羧甲基壳聚糖(Polylaticacid．O．carboxymethy’lated 肝细胞进行了体外培养，观察培养后肝细胞的形态和功能。 1．材料和方法 1．1材料及仪器 中国实验用小型猪，雌雄不限，体重24kg。由南通大学动物实验中心提供。 聚乳酸(Polylatic chitosan，O—CMC)自制。RPMI (o-carboxymethylated 第十九届全国肝胆胰外科学术交流会资料汇编 · 33 · 限公司。其他试剂为国产分析纯。JY92．2D型超声均质仪购自宁波新芝生物科技股份有限公司。恒温 水浴箱购自上海医疗器械厂。AvantiJ-25型高速离心机、低温超速离心机购白美国BECKMAN COULTER公司产品。超净工作台购自苏州净化设备厂。全自动生化分析仪(VITROS250)购自美国 冷冻浓缩仪购自丹麦HETO公司。CSPM3000原子力显微镜为中科院本原纳米仪器有限公司产品。 1．2方法 1．2．1PLA．O．CMC纳米粒子的制备 分反应(约25min左右)，待其中的有机溶剂发完全后得到乳光较重的均匀悬浊液。将此悬浊液先以 吸去部分上清液，将沉淀冷冻抽干取出并置于紫外灯下照射12h，消毒后备用。 1．2．2猪肝细胞的分离和培养 采用原位胶原酶循环肝灌注法分离猪肝细胞【5l。将分离所得肝细胞分为两组进行培养：①普通培 以促进纳米材料与肝细胞的结合且有利于细胞集聚形成球形体。 1．2．3肝细胞形态观察和功能检测 胞形态。 1．2．4统计学处理 数据以x姆表示。用State 著性。 2．结果 2．1纳米材料的表征 2．¨纳米材料的物理学表征 冻干后得到的PLA．O．