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免疫细胞培养攻略之后续研究（六）

概述

免疫细胞培养的六个基本流程：样本制备、细胞分选、分型鉴定、扩增培养、质量优化、后续研究。小爱已经给大家详细介绍了《免疫细胞培养攻略之

样本制备（一）》、《免疫细胞培养攻略之细胞分选（二）》、《免疫细胞培养攻略之分型鉴定（三）》、《免疫细胞培养攻略之扩增培养（四）》、《免

疫细胞培养攻略之质量优化（五）》今天我们继续来了解一下后续研究。

后续研究（Follow-UpStudy）：运用流式细胞术、ELISA、细胞共培养等实验技术研究免疫细胞的功能（杀伤能力、分泌细胞因子、吞噬功能、增殖能力

等）。免疫细胞可以做的后续研究实在是太多了，比如：CAR-T/NK/M，肿瘤细胞与免疫细胞共培养、类器官免疫共培养，细胞因子风暴等等，小爱在这里抛

砖引玉，给大家介绍3个免疫细胞研究的热门思路：NK细胞杀伤能力鉴定、混合淋巴细胞反应、Treg体外抑制实验。

NK细胞杀伤能力鉴定

NK作为自带免疫记忆的自然杀伤细胞，对其杀伤功能的研究也是十分火热。

NK细胞主要通过以下四个途径杀伤靶细胞：

①NK细胞脱颗粒，释放穿孔素和颗粒酶杀伤靶细胞；

②活化的NK细胞通过释放细胞因子来杀伤靶细胞；

③通过死亡受体如Fas/FasL和TNF-α/TNFR-1途径诱导靶细胞凋亡；

④介导ADCC作用杀伤靶细胞[1]

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图1NK细胞杀伤靶细胞的四种途径

体外研究NK细胞杀伤功能主要是将NK细胞与靶细胞（通常是K562细胞）共培养，然后通过检测靶细胞释放的酶或者用CAM、CFSE标记靶细胞，通

过检测荧光，也可以通过MTT/CCK8检测细胞数量，从而得出NK细胞的杀伤活性，也可以检测NK细胞分泌的细胞因子或者脱颗粒指标CD107a。当然我们

可以换成其他的免疫细胞和肿瘤细胞进行共培养。

小爱也给大家整理了步骤可以参考：

1.将用荧光染料GFP，CFSE标记的靶细胞（一般为肿瘤细胞）接种到96孔板中，不同肿瘤细胞的接种密度可以参考图2；

图2用于NK和肿瘤细胞共培养中不同肿瘤细胞的接种密度

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2.第二天，将培养基更换成NK细胞的培养体系，并按照靶细胞和效应细胞（NK）13的比例加入NK细胞，0-12h分别进行荧光显微镜拍照；

注意：靶细胞和效应细胞的共培养比例以及时间均需要通过预实验确定。

图3不同上皮细胞系在与NK共培养中的累积存活曲线

表1肿瘤免疫共培养表格

名称货号应用

人自然杀伤细胞(NK)扩增试剂盒abs9824NK细胞培养

RecombinantHumanIL-15Proteinabs00818

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