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免疫细胞培养攻略之后续研究(六).pdf

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免疫细胞培养攻略之后续研究(六)

概述

免疫细胞培养的六个基本流程:样本制备、细胞分选、分型鉴定、扩增培养、质量优化、后续研究。小爱已经给大家详细介绍了《免疫细胞培养攻略之

样本制备(一)》、《免疫细胞培养攻略之细胞分选(二)》、《免疫细胞培养攻略之分型鉴定(三)》、《免疫细胞培养攻略之扩增培养(四)》、《免

疫细胞培养攻略之质量优化(五)》今天我们继续来了解一下后续研究。

后续研究(Follow-UpStudy):运用流式细胞术、ELISA、细胞共培养等实验技术研究免疫细胞的功能(杀伤能力、分泌细胞因子、吞噬功能、增殖能力

等)。免疫细胞可以做的后续研究实在是太多了,比如:CAR-T/NK/M,肿瘤细胞与免疫细胞共培养、类器官免疫共培养,细胞因子风暴等等,小爱在这里抛

砖引玉,给大家介绍3个免疫细胞研究的热门思路:NK细胞杀伤能力鉴定、混合淋巴细胞反应、Treg体外抑制实验。

NK细胞杀伤能力鉴定

NK作为自带免疫记忆的自然杀伤细胞,对其杀伤功能的研究也是十分火热。

NK细胞主要通过以下四个途径杀伤靶细胞:

①NK细胞脱颗粒,释放穿孔素和颗粒酶杀伤靶细胞;

②活化的NK细胞通过释放细胞因子来杀伤靶细胞;

③通过死亡受体如Fas/FasL和TNF-α/TNFR-1途径诱导靶细胞凋亡;

④介导ADCC作用杀伤靶细胞[1]

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图1NK细胞杀伤靶细胞的四种途径

体外研究NK细胞杀伤功能主要是将NK细胞与靶细胞(通常是K562细胞)共培养,然后通过检测靶细胞释放的酶或者用CAM、CFSE标记靶细胞,通

过检测荧光,也可以通过MTT/CCK8检测细胞数量,从而得出NK细胞的杀伤活性,也可以检测NK细胞分泌的细胞因子或者脱颗粒指标CD107a。当然我们

可以换成其他的免疫细胞和肿瘤细胞进行共培养。

小爱也给大家整理了步骤可以参考:

1.将用荧光染料GFP,CFSE标记的靶细胞(一般为肿瘤细胞)接种到96孔板中,不同肿瘤细胞的接种密度可以参考图2;

图2用于NK和肿瘤细胞共培养中不同肿瘤细胞的接种密度

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2.第二天,将培养基更换成NK细胞的培养体系,并按照靶细胞和效应细胞(NK)13的比例加入NK细胞,0-12h分别进行荧光显微镜拍照;

注意:靶细胞和效应细胞的共培养比例以及时间均需要通过预实验确定。

图3不同上皮细胞系在与NK共培养中的累积存活曲线

表1肿瘤免疫共培养表格

名称货号应用

人自然杀伤细胞(NK)扩增试剂盒abs9824NK细胞培养

RecombinantHumanIL-15Proteinabs00818

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