南京大学实验报告-果蝇的单因子杂交实验.doc

生命科学学院 单因子分离规律验证 实验目的 熟悉以果蝇为材料进行遗传学杂交实验的基本方法； 验证遗传的基本规律——分离规律 预备知识 遗传是自然界极其复杂的生命现象，只有通过少数有相对性状差异的类型之间进行杂交，并分析这些性状在亲本和杂种子代中的表现，才易于在复杂的遗传现象中找到遗传的基本规律。分离规律、自由组合规律、连锁规律等都是采用这种杂交实验的方法发现的。 在果蝇杂交中，有相对性状的品系之间进行杂交，杂种F1表现为显性，杂种F1形成配子时，带有显隐杂合等位基因的一对同源染色体对等分离，等位基因也随着分离，产生两种不同配子，因此，不论显性性状还是隐性性状都将在F2中按一定的比例在不同的个体上重新出现。 实验原理 本实验采用黑体与野生型的交配收集并统计F2代的方式，通过验证其后代比例是否为野生：黑体=3:1的比例，来验证单因子的分离定律。 实验材料 野生型黑腹果蝇、黑体果蝇 解剖镜、毛笔、麻醉瓶、白瓷板、标签、吸水纸、培养瓶 (4瓶/人)、乙醚、75%乙醇 实验步骤 亲本果蝇的培养。 ② 处女蝇的收集： 清除成虫后10小时内进行收集，收集的处女蝇分品系单独培养，如一次收集数量不够，可再作第二、第三次收集。 PS：处女蝇的收集非常重要。果蝇交配一次后，雄蝇的精子会贮存在雌蝇体内陆续使雌蝇的卵受精，如果杂交不用处女蝇，会造成杂交后代的实验结果不准确。 ③ 选处女蝇分正交（++♀/bb♂） 反交（bb♀/++♂）两个杂交组合，分别置于新鲜培养瓶中，每瓶5～6对，贴上标签，注明亲本类型，实验日期，姓名，学号等，然后置于22℃ ～25℃培养箱中培养。 一周后，清空亲本果蝇。 PS：清空亲本的操作是因为子一代是杂合子，其自交才是杂交实验，测出准确的分离比。 ⑤ 二周后，观察F1果蝇体色，看是否与预期结果相符。 ⑥ 取5-6对F1果蝇放入新鲜培养瓶中，每种组合放两瓶。 ⑦ 三周后，清空F1果蝇。 PS：清空F1是因为之后的实验结果需要来自F2的计数，若F1混在其中会影响实验结果。 亲本是野生型（显性纯合子），与子一代交配不算杂交，会影响实验结果。 ⑧ 四周后，F2成蝇长出，统计各类果蝇数，2～3天后再统计一次，统计过的果蝇处死。 ⑨ 在表格中记录实验结果。 注意事项（也是影响实验成败的一些关键因素） 1）进行杂交的亲本必须是纯种，自交不产生分离，这样的个体才能作为杂交的亲本。 2）必须防止意外的杂交，雌蝇应选用孵化后12小时内的处女蝇。 3）正确记录杂交子代每种类型的个体数，并且尽可能获得较大的杂交群体，以正确可靠地反映出遗传规律。 4）保持相对稳定的环境条件，使杂交性状的表现不致因不同的条件影响而改变。 实验结果 F1代： 观察结果 统计日期 灰体（♀）×黑体（♂） 黑体（♀）×灰体（♂） 灰体数 黑体数 灰体数 黑体数 4月 日 69 0 77 0 由F1代实验结果可知，在黑体与灰体性状中,灰体对黑体为显性。 F2代： 观察结果 统计日期 灰体（♀）×黑体（♂） 黑体（♀）×灰体（♂） 灰体数 黑体数 灰体数 黑体数 4月 日 126 48 135 49 野生型 （正、反交合并） 突变型 （正、反交合并） 总计 实际观察数（O） 274 97 371 预期数（E） 278.25 92.75 371 偏差（O-E） -4.25 4.25 (O-E)2/E 0.06 0.20 0.26 自由度df=2-1=1 P=0.05时查表得x2为3.84,实验所求得的X2值与查表所得的X2相比较时，0.263.84，统计学上认为在5%显著水准上差异不明显，故野生型与突变型F2代之比为3:1。孟德尔遗传定律得到验证。