限制性核酸内切酶分子手术刀.ppt

限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 限制性核酸内切酶 .切点： 3.结果： 黏性末端和平末端 DNA连接酶——“分子缝合针” DNA连接酶——“分子缝合针” 基因的载体——“分子运输车” 例3、依右图有关基因工程的工具酶功能的叙述，不正确的是 A、切断a处的酶为限制核酸性内切酶 B、连接a处的酶为DNA连接酶 C、切断b处的酶为解旋酶 D、切断b处的为限制性内切酶 (1)从基因文库中获取目的基因 1．与“限制性内切酶”作用部位完全相同的酶是 A．反转录酶； B．RNA聚合酶； C．DNA连接酶； D．解旋酶； 4、下列技术依据DNA分子杂交原理的是： ①用DNA分子探针诊断疾病 ②B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的杂交 ③用基因探针快速灵敏地检测水中病毒的含量 ④目的基因与运载体结合成重组DNA分子 ⑤利用单克隆抗体诊断疾病。 A．②③ B ①③ C ①③⑤ D①③④ 5.下列育种所采用的生物技术或原理依次是 美国科学家将生长激素基因注入小白鼠的受精卵中，得到了体型巨大的“超级小鼠”； “人鼠嵌合抗体”的合成； 荷兰科学家将人乳高铁蛋白基因移植到牛体内，牛产出含高铁蛋白的牛奶； 遨游过太空的青椒种子培育的“太空椒”比正常青椒大一倍 ①基因工程 ②蛋白质工程 ③诱变育种 ④杂交育种 A.②③②④ B.①①②③ C.①②①③ D.①②①④ 6．（10分）干扰素是治疗癌症的重要药物，它必须从血中提取，每升人血只能提取0.5μg，所以价格昂贵。现在美国加利福尼亚州的基因公司用如下图的方式生产干扰素。试分析原理和优点。 （1）从人的淋巴细胞中取出干扰素基因，一般是用 的方法，此基因在基因工程中称为 。 （2）此基因与细菌的质粒相结合要依靠 ，其作用部位是磷酸二酯键，然后将目的基因移植到酵母菌体内，酵母菌在基因工程中叫 。 （3）科学家在培养转基因植物时，常用 ____中的质粒做运载体。质粒是基因工程最常用的运载体，它具备运载体的哪些条件？ ① ；② ③ 。 （4）中国青年科学家陈炬成功地把人的干扰素基因移植到烟草的DNA分子上，使烟草获得了抗病毒的能力，其物质基础是 。 （1）人工合成基因 目的基因 （2）DNA连接酶、受体细胞 （3）土壤农杆菌①能够在宿主细胞中复制并稳定地保存 ②具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接 ③具有某些标记基因，便于进行筛选 。 （4）DNA结构相同 * 分布：主要在原核生物中 作用特点： 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并在特定切点切割 DNA重组技术的基本工具 EcoRI限制酶 切点：磷酸二酯键 磷酸二 酯键 连接DNA双链 DNA连接酶 磷酸二酯键 连接DNA单链 DNA聚合酶 切割DNA双链 限制性内切酶 氢键 双链—单链 解旋酶 作用的 化学键 作 用 物 质 载体的作用： 1、将外源基因转移到受体细胞中去。 2、利用运载体在受体细胞内，对外源基因进行大量复制并表达。 常用的载体有：（多为人工改造） 质粒，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒等 载体必须具备的条件： 1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存； 2、具有一个或多个限制酶切点，以便与外源基因连接； 3、具有某些标记基因，便于进行筛选。（如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等 ） 4、对受体细胞无害。 基因工程的基本操作程序 目的基因的获取 基因表达载体的构建（核心） 将目的基因导入受体 细胞 操作过程 目的基因的检测与鉴定 1、目的基因的获取： 从已有物种中直接分离， 人工合成（基因比较小，序列已知）。 2、获取方法： （1）从基因文库中获取目的基因。 （2）利用PCR技术扩增目的基因 （3）人工合成 一、目的基因的获取 基因文库 基因组文库 部分基因文库 （cDNA文库） DUCK179制作 95OC 55OC DNA 绿色是引物 72OC 高温变性 低温复性 中温延伸 (2)PCR技术—聚合酶链式反应 原理： 前提： 条件： PCR扩增仪 DNA双链复制的基本原理 一段已知目的基因的核苷酸序列 四种脱氧核苷酸 一对引物 热稳定DNA聚合酶(Taq酶） DNA的两条链为模板 温度控制 —— 核心 切口 (二)基因表达载体的构建 二、基因表达载体的构建 1基因表达载体的组成 DUCK1