受强力霉素调节的自杀基因表达载体系统的构建与在乳腺癌细胞株(MCF—7)的表达.pdf

维普资讯 第 6卷 第 2期 生命科学研究 V01．6 No．2 2002年 6月 LifeScienceResearch June2m2 受强力霉素调节的自杀基因表达载体系统的构建 和在乳腺癌细胞株 (MCF．7)的表达 罗赛群，胡维新，易伟峰，曾赵军，陈 迁 (中南大学 湘雅医学院分子生物学研究中心，中国湖南 长沙 410078) 摘 要：自杀基因治疗是恶性肿瘤基因治疗中最常用的速径之一 以逆转录病毒载体——DRe1RE为基础进 行载体构建．首先使用PCR技术对单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSVtk)进行扩增，将 HSVtk基 因插^到pRe— vTRE，形成重组栽体pRevTREdHSV~，用磷酸钙共沉淀法，经过两轮转染，分别将 pRevTRE／HSVtk和 pRevT~-On 质粒导入乳腺癌细胞株 (MCF-7)经过潮霉素B(Hyg~mycinB)和G418筛选，建立了一株稳定的受四环素衍生 物——强力霉素(Doxyeycline，Box)调控、表达 HsvIk基因产物的人乳腺癌细胞株 MCFq／3tFJtk／Tet—On．}珏vLk基 因表迭产物可以将无毒性的药物前体Ganciclo,Ar(GCV)转变成一种有毒的代谢产物，从而杀死乳腺癌细胞株 (MCF-7j，达到基 因治疗的 目的 关键词：人乳腺癌细胞株；基因治疗；自杀基因；旁观者效应；基因表达调控 ；强力霉素 中图分类号： 84； 86 文献标识码：A 文章编号：1007．78472【002)02．0137-05 TheConstructionofSuicideGeneExpressionVectorControlledby Tet．OnandtheTransfectionofHumanBreastCancerCellLine(MCF．7) LUOSai—qun，HUWei—xin，YIWei—feng，ZENGZhao—ju．，CHENQian (MolecularBiologyResearchCenter， 埒 SchoolofMedb-ine，CentralSouth￡ !呻 ．CMngsha410078，Huna~，China) Abstract；SuicidegenetherapyisoneofthechoicesintheCalleA~rgenehterapymseamh．RevTet—Ongeneexpres— sionsystem WaSusedtodeliverthesuicidegeneHSVtktohumanbreaatcancercellfineMCF—7·andhtetkgeneex—· pressionwascontrolledbytetracyclinederivative，doxycycline(Dox)．HSVtkgeneWaSinsertedintotheplasmid pRevTRE andhtemcoir~oiiLmltretrovlrM vectorpRevTRE／HSVtkWaSconstm~ed．SuicidegeneHSVtkwasex· pressed inthepresenceofDox．TwotransfcetionsofpRevTRE／HSVtkandpRevTet·Onwereperformedf MCF一7 celllinebyusingmodifiedcalcium phosphateco—precipitationmehtodrespectively，followedbyHygromycinB nad G418 Tet-OnMCF-7celllinestablyexpressingtet—regulatde tkgenewasestablished．ThiscelllineWas namedas MCFItk／TRE／Tet·OnnadHSVtkgeneexpressi