牛胎儿皮肤成纤维细胞的分离培养及转染I.PDF

畜牧兽医学报 ， （）： ２０１１４２４ ５８５５９２ 　 － ＡｃｔａＶｅｔｅｒｉｎａｒｉａｅｔＺｏｏｔｅｃｈｎｉｃａＳｉｎｉｃａ 　 　 　 　 牛胎儿皮肤成 纤维细胞 的分离培养及 转染 基因 Ｉ ｒ１ ｐ ， １ ２ ２ ２ ２ ２ ２ ２ ２ ２ ＊ ， ， ， ， ， ， ， ， 宋永利 何 小宁 华 松 兰 杰 郑 月茂 贺 小英 李 吉 霞 权 富生 张 涌 　 　 　 （ ， ； 吉林 农业 科 技 学院动物医学院 吉林 西北农 林 科 技 大学动物医学 院 农业部 １． １３２１０１ ２． ， ） 动物生殖 生 理 与胚 胎 工 程 重点 开放 实验室 杨 凌 ７１２１００ ： ， ， 摘 要 为了为核 移植 提供供体 细胞 本 研究 构 建 了真 核 表达 载体 ＰＥＧＦＰＳＲＡ Ｉｒ１并研究了 牛 胎 儿 皮 肤 成 纤维 　 － － ｐ ， 。 ， 细胞的体 外 分 离 培养 进行了 基因转染 克 隆 基因 和 启 动 子 并 构 建 了 巨噬细胞特 异性 真 核 表达 Ｉ ｒ１ Ｉ ｒ１ ＳＲＡ ｐ ｐ － 。 ， 、 ， 载体 用 组 织 块 贴 壁法 分 离 培 养 牛 胎 儿 皮 肤 成 纤 维 细 胞 在 体 外 经 传 代 纯 化 后 用 电穿 孔 法 将 真 核 表 达 载 体 转染 至 经 体 外 纯 化 的第 代 牛 胎 儿 成 纤 维 细 胞 ， 后 观 察 荧 光 表 达 ， 后 加 入 ＰＥＧＦＰＳＲＡ Ｉｒ１ ４ １０ ２４ｈ ４８ｈ ６００ － － ｐ ～ －１ －１ · 　 ， ， · ， ， 。 筛选 周 持续 筛选 然后 挑 选 单 克 隆 继 续 扩 大 培 养 对 稳 定 转 染 的牛 胎 儿 成 纤 ｇ ｍＬ Ｇ４１８ １ ３