观赏植物组织培养第四章 基本操.doc

基本操作 第一节 培 养 基 的 制 备 任何一种培养基都是由多种化合物组成， 如每次配制培养基时现配现用，影响工作效率；为减少工作量，一般常将同类 药品扩大一定的倍数后，配制成浓缩液亦称母液，置冰箱中保存，可供多次使用 。 一、母液的配制 母液的配制是把培养基中同一大类的成分按用量配制到一起，分为： 大量元素母液 微量元素母液 铁盐母液 有机物类母液 也可将维生素和氨基酸类分别单独配制。 大量元素母液的配制（MS） 微量元素母液的配制(MS) 铁盐的配制 有机化合物的配制 生长调节物的配制 生长调节物质的每一种均要单独配制。绝大多数生长调节物质不溶于水，须加入酒精、盐酸或碱促溶。 生长素类 IAA 、NAA 溶于95％的乙醇。 IBA 溶于50％的酒精。 2，4－D 溶于1N NaOH 。 GA3 溶于酒精 细胞分裂素 KT、6－BA 溶于1NHCl Zt 溶于95％酒精 生长调节物质的用量极微，其浓度通常以 mg/mL 表示。 一般配制成0.1－1.0mg/mL的溶液。称量、溶解后定容至所需的容量，贴好标签，著名名称、浓度（mg/mL）、配制日期，存放于冰箱的冷藏室中，随用随取。 二、培养基的配制 糖 ∣ 琼脂 → 混合 →溶化 →定容→调PH值 ∣ 药（各种母液） 1、 配制培养基时，先将已配好的各种母液从冰箱中取出，按顺序排好；准备好所需的烧杯、量筒等。 2、根据所配制的培养基配方及体积数，称取琼脂和蔗糖，用少量的蒸馏水溶化。 3、计算所需各种药品母液的用量，按大量元素、微量元素、铁盐、有机物、生长调节 物质母液的顺序依次吸取，混合在一起。 4、将混合到一起的各种母液倒入已溶化的琼脂、糖溶液中，定容至所需的体积 5、测定PH值，按培养的植物材料对PH值的要求，用1N HCl或 　　1N NaOH调节所需 的PH值，在培养基凝固前，分装到培养瓶中并封口。 6、置高压灭菌锅中进行高压灭菌。 三、培养基配方的表达 MS+6-BA1.0+IBA0.1+糖3.0% ( PH 5.8 ) 含义：1、基本培养基为 MS 2、 6-BA1.0 即：每升培养基加入6-BA 1.0mg 3、 IBA0.1 即：每升培养基加入IBA0.1mg 4、每升培养基加糖30g 第二节 无菌培养体系的建立 一、外植体的种类及选择 ： （一）外植体的种类 1、带芽的外植体 2、分化的器官和组织 3、胚 4、花粉和花药 5、球茎、鳞茎、块茎 11/1１／ 1特点： 形态已基本建成，生长速度快； 遗传性稳定； 适于离体快繁； 可获得脱毒苗。 包括茎尖的顶芽、腋芽、根茎连接处的萌蘖等是组织培养中应用最多的取材部位。 2、分化的器官和组织 包括：嫩茎、嫩叶、形成层、根、花瓣、花萼等二倍体组织。 这些已经分化的组织经诱导后可以过渡到脱分化的状态，形成芽体或胚状体，得到完整的植株。花卉中用叶、花 瓣、花萼作为外植体的情况比较多。 特点：易发生遗传变异，不利于保持原种性；但可以扩大材料来源，提高繁殖率。 3、胚 指自然状态下成熟胚和未成熟胚的培养。可以使发育不完全的幼胚继续发育成植株，克服远缘杂交不育。 特点：带有极幼嫩的分生组织。 4、花粉和花药 经诱导可形成单倍体植株。 从严格的组织培养的角度讲：花粉为单倍体（小孢子）；花