《H3病毒微滴式数字RT-PCR检测方法》征求意见稿.pdf

ICS11.220

B41

团体标准

MA

T/CVMAXXXXX—XXXX

H3亚型犬流感病毒

微滴式数字RT-PCR检测方法

MethodofdropletdigitalRT-PCRfordetectionofHc

3anineinfluenza

（征求意见稿）

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

中国兽医协会发布

XX/TXXXXX—XXXX

H3亚型犬流感病毒微滴式数字RT-PCR检测方法

1范围

滴T-PCR检测的操作方法。

3einflnza，H3CIV）微式数字R

本文件规定了H3亚型犬流感（HCaninue

本文件适用于犬的鼻咽拭子样本中H3亚型流感病毒核

犬酸的检测。

2规范性引用文件

其中，注日期的引用文件，

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适于

用本文件。

数字RT-PCR：数字反转录聚合酶链式反应（diita

glreversetransri

cptpolymersec

ahainea

rction）

BH：

Q1无荧光淬灭基团（blackholequencher-1）

FAM：6-羧基荧光素（6-carboxyfluorescein）

ncid）

RNA：核糖核酸（riboucleica

5原理

微滴式数字PCR（DropletDigitalPCR，ddPCR）的技术原理是利用微滴化技术将一份反应体系分成

数万个纳升级的微滴进行定量PCR检测，本质上是将传统定量PCR的一次检测变成数万次检测，提高了

检测的灵敏度和精准度。微滴发生器可以将每一份扩增体系分成数万个均匀的纳升级微滴，每个微滴不

含或者含有一个至数个待检核酸靶分子。每个微滴都将作为一个独立的PCR扩增体系，在PCR扩增仪上

进行终点PCR扩增。利用微滴分析仪逐个对每个微滴进行检测，有荧光信号的微滴判读为1，没有荧光

信号的微滴判读为0。然后根据泊松分布原理以及阳性微滴的比例，计算出待检靶分子的浓度或拷贝数。

6试剂与材料

6