GB/T 28981-2012齿兰环斑病毒检疫鉴定方法.pdf

ICS 65. 020. 01 ——_ — B 16 G 目 中华人民共和国国彖标准 GB/T 28981—2012 齿兰环斑病毒检疫鉴定方法 Detection and identification of odontoglossum ringspot virus 2012-12-31 发布 2013-06-01 实施 GB/T 28981—2012 ■ i r ■ ■ i 刖 吕 本标准按照GB/T 1. 1-2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC 271)提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国宁波出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫 局、中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国浙江出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：闻伟刚、陈先锋、杨翠云、郭立新、鲁洁、张永江、张明哲、徐瑛、崔俊霞、张慧丽。 T GB/T 28981—2012 齿兰环斑病毒检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了齿兰环斑病毒血清学和分子生物学特征的检测方法。 本标准适用于种子 、种球、花卉和种苗等植物材料中齿兰环斑病毒的检测，也适用于蛭虫等传播媒 介中该病毒的检测。 2 齿兰环斑病毒基本信息 中文名：齿兰环斑病毒 学 名：odontoglossum ringspot virus 缩写：ORSV 属烟草花叶病毒属｛Toba 1 novirus），齿兰环斑病毒其他信息参见附录Ao 3方法原理 利用基于抗原抗体反应的双抗夹心酶联免疫吸附测定 （Double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay, DAS-ELISA） 、体外DNA合成技术的反转录聚合酶链式反应（Reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR ） 、实时荧光反转录聚合酶链式反应 （real-time fluorescent RT-PCR）进行检测鉴定。 4仪器设备、用具和试剂 4. 1仪器设备 PCR仪、实时荧光PCR仪、超净工作台、电子天平（感量：0.001 g） 、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、 高速冷冻离心机、超低温冰箱 （一80 °C ）、高压灭菌锅、小型食品加工机、微波炉、酶标仪。 4.2用具 可调式微量移液器（2 mL,10 mL.100 “L 、200 yL 、l 000 卩L 、5 000 卩L）及相应的无RNase吸头、无 RNase离心管、PCR管和研钵等。 4. 3试剂 主要试剂和缓冲液见附录B和附录C。 5检测 5. 1样品制备 取0.5 g〜10 g种子、种球鳞片或畸形、变色症状的叶片等植物组织，在研钵或小型食品加工机中 1 GB/T 28981—2012 充分研磨，取五分之一量的均匀后样品，转入离心管中，