METTL5调控TGFβ2影响肝癌细胞增殖和迁移的机制研究.pdf

搞要

摘要

目的：

TGCAHCCDB

利用生物信息学技术分析及数据库里的肝癌数据中甲基转

移酶5（RRNAN6-Adenosine-MethyltransferaseMETTL5）的表达与生存预后、

临床分级分期的关系；验证METTL5在肝癌组织与肝癌细胞株中的表达情况；

通过体外功能实验明确METTL5表达改变对肝癌细胞增殖能力及迁移能力的影

响；探讨METTL5调控转化生长因子β2（Transforminggrowthfactor-beta2

TGFβ2）影响肝癌增殖能力及迁移能力的机制。

方法：

1.利用TGCA数据库及HCCDB数据库中METTL5的表达与生存预后、临

床分级分期的关系。

2.Real-timePCRMETTL5mRNA

在肝癌组织中利用检测的的表达、使用

westernblot蛋白印迹法及免疫组化（IHC）检测METTL5的蛋白表达；在细胞系中，

分别在人正常肝脏细胞HL7702和肝癌细胞株HCCLM3、SMMC7721、Hep3B和

MHCC97HReal-timePCRMETTL5mRNAwesternblot

中使用检测的和使用蛋白

印迹法检测METTL5的蛋白表达水平；

3.通过干扰和过表达METTL5，使用CCK-8、EDU细胞增殖检测（荧光成像

METTL5Transwell

法）检测改变表达变化后细胞增殖能力变化，使用细胞划痕实验、

迁移实验检测改变METTL5表达变化后细胞迁移能力的变化；

4.通过分析TCGA数据库中肝癌数据，预测METTL5在肝癌中可能有联系的通

TCGAMETTL5TGFβ2

路或可能存在的功能；利用数据库中肝癌数据对与的表达

做相关性；采用Real-timePCR检测检测在肝癌细胞中改变METTL5表达变化后

TGFβ2的mRNA，利用westernblot蛋白印迹法检测改变METTL5表达变化后

TGFβ2的蛋白表达变化；

5.在肝癌细胞株HCCLM3中稳定干扰METTL5后再进行过表达TGFβ2，在

肝癌细胞株Hep3B中过表达METTL5后干扰TGFβ2，westernblot蛋白印迹法检

METTL5TGFβ2CCK-8EDU

测和的蛋白表达情况、实施功能实验（、细胞增殖

检测（荧光成像法）、细胞划痕实验、Transwell迁移实验）观察肝癌细胞株的增

殖能力及迁移能力的变化。

III

搞要

结果：

1.TGCA数据库及HCCDB数据库中分析发现METTL5在肝癌中的表达明显高

于正常组织，且高表达的METTL5是肝癌患者预后不良的独立危险因素；

2.METTL5在肝癌组织中高表达，METTL5在癌旁中的表达明显低于肝癌组

织；METTL5在肝癌细胞系中的表达明显高于正常肝细胞；

3.干扰METTL5后，可以观察到肝癌细胞的增殖及迁移能力下降。

4.KEGG富集分析提示METTL5可能通过KEGG_CELL_CYCL