CKAP4对大鼠肝癌细胞CBRH-7919增殖和迁移的调控作用研究.pdf

摘要

肝癌是最常见的恶性肿瘤疾病，分为原发性肝癌和继发性肝癌，其中肝细胞癌占

肝癌病因的90%。肝癌早期症状不明显、预后性较差、死亡率较高等问题逐渐被人们

所重视，由于肝癌易复发、易转移的特性，对于肝癌增殖及转移能力方面的研究逐渐

成为热点。

细胞骨架相关蛋白4（cytoskeletonassociatedprotein4，CKAP4）作为一种可逆棕

榈酰化且非糖基化的II型跨膜蛋白，能够与微管结合以维持内质网结构。最近的研究

表明CKAP4可作为肿瘤诊断与治疗的有效标志物，且在癌症的增殖和迁移方面具有重

要作用，但其在肝癌中作用机制仍鲜有研究。本实验室在前期研究中发现，对大鼠进

行部分肝切除后的恢复过程中CKAP4的表达量升高，且CKAP4的上调表达促进了正

常肝细胞的增殖能力，提示CKAP4对于维持细胞的正常生命历程发挥重要作用。

本文旨在深入研究CKAP4对于大鼠肝癌细胞CBRH-7919增殖和迁移的调控作用，

为后续相关研究提供相应的理论基础。首先通过瞬时转染SI-CKAP4干涉片段来降低

CBRH-7919细胞中CKAP4的表达，利用RT-qPCR和WesternBlot实验筛选出最佳干涉

片段。MTT法、CCK8法、Transwell实验、CFU实验以及流式细胞术检测CKAP4下调

对细胞活力、增殖、迁移、侵袭能力和凋亡的影响。结果表明，CKAP4的下调增强了

CBRH-7919细胞活力，促进了细胞的增殖、迁移和侵袭，并且抑制了细胞凋亡。同时

构建CKAP4表达载体，以瞬时转染的方法提高CBRH-7919细胞中CKAP4的表达水平，

采取上述实验方法对CBRH-7919细胞的活力、增殖、迁移、侵袭能力和凋亡进行检测。

结果显示，CKAP4的过表达降低了CBRH-7919细胞的活力，抑制了细胞的增殖、迁移

和侵袭，且促进了细胞凋亡。随后用鬼笔环肽对CBRH-7919的细胞骨架进行染色，发

现过表达CKAP4细胞中的细胞骨架结构间连接性明显减弱。WesternBlot实验结果显

示CKAP4的下调提高了间充质标志物蛋白的表达水平，降低了维持上皮细胞状态相关

蛋白的表达水平。进一步对β-catenin通路中的下游蛋白进行检测，发现CKAP4的过

表达显著抑制了Wnt/β-catenin通路的激活。而CKAP4表达下调则出现相反的结果。利

用免疫荧光法检测CKAP4与CRBP1的共定位情况，并通过CO-IP验证CKAP4与

CRBP1的相互作用，结果证实二者存在相互作用。在CKAP4敲低的细胞中过表达

CRBP1进行回补，检测细胞的活力、增殖、迁移和侵袭。结果显示，CRBP1的过表达

回补了CKAP4敲低所带来的影响。提示CKAP4可能通过与CRBP1相互作用抑制

Wnt/β-catenin信号通路的激活从而抑制了肝细胞的癌变和恶性表型。

本文通过研究CKAP4对大鼠肝癌细胞CBRH-7919增殖和迁移的调控作用，对后

续的相关研究提供相应的理论基础。

关键词：CKAP4，CBRH-7919细胞，CRBP1，β-catenin

ABSTRACT

Hepatocellularcarcinomaisthemostcommonmalignanttumordisease,dividedinto

primarylivercancerandsecondarylivercancer,ofwhichhepatocellularcarcinomaaccounts

for90%oftheetiologyoflivercancer.Theearlysymptomsoflivercancerarenotobvious,the

prognosisispoor,andthemortalityrateishigh,whichhasgraduallybeenpaidattentionto

peop