血型鉴定与交叉配血.ppt

盐水介质配血酶介质配血菠萝酶，无花果酶，木瓜酶抗球蛋白介质配血经典方法，加LISS（低离子介质溶液）的方法聚凝胺介质配血凝胶方法配血交叉配血试验方法盐水介质配血方法患者献血者主侧次侧离心看结果阳性阴性原理：凝聚胺分子是带高价阳离子多聚季铵盐，溶解后带有很多正电荷可以中和红细胞表面负电荷，有利于红细胞凝聚，低离子强度溶液也能降低红细胞的Zeta电位，可进一步增加抗原抗体间的吸引力。当血清中存在IgM或IgG类血型抗体时，与红细胞发生紧密结合，此时加入枸橼酸盐解聚液以消除聚凝胺的正电荷，使IgM或IgG类血型抗体与红细胞产生的凝集不散开；如果血清中不存在IgM或IgG类血型抗体，加入解聚液可使非特异性凝集消失。PARTONE血型鉴定根据红细胞膜上有无A抗原或B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。通常利用红细胞凝集试验，通过正定型和反定型鉴定ABO血型。正定型是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原；反定型是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗A或抗B。血型抗原红细胞血型抗原：已确定的有29个系统、200多种抗原其中必查血型抗原：ABO抗原和RhD抗原常见的血型抗体分子大多属于IgM或IgG两类五类免疫球蛋白具有相似的单体结构两条轻链(L链)和两条重链(H链)组成的四肽链(H2L2)---单体结构1、IgG抗体分子较小，通常以单体形式存在。多经妊娠或输血后免疫产生。在盐水介质中只能致敏相应抗原的红细胞，而不能使之凝集，所以又称为不完全抗体。必须通过特定的方法（如抗人球蛋白）使致敏红细胞发生凝集。2、IgM抗体分子最大的一种Ig，多以五聚体形式存在。在盐水介质中能直接连接相应的红细胞，使之发生肉眼可见的凝集反应，因此又称为完全抗体。（一）盐水介质法抗原抗体反应——在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B抗体，则产生凝集现象→从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原→判断血型。含某种凝集原的红细胞+含相应凝集素的血清红细胞凝集反应(agglutination)实验原理血型不相容的两人血液混合,则红细胞可凝集成簇抗A抗B试剂STEP4STEP3STEP2STEP1抗A、抗B试剂血清5%的A型、B型红细胞悬液受检者血清5%的受检者红细胞悬液取血一滴，加入含1ml生理盐水的小试管内，混匀，即得约5％红细胞悬液。玻片法取玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两端用记号笔标明A及B，并分别各滴入A及B标准血清一滴。用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻片两端的血清上，注意勿使滴管与血清相接触。竹签两头分别混合，搅匀。用两根分别用来混合A型和B型血清和红细胞悬液观察结果如有凝集反应可见到呈红色点状或小片状凝集块浮起。先用肉眼看有无凝集现象，肉眼不易分辨时，则在低倍显微镜下观察，如有凝集反应，可见红细胞聚集成团。判断血型根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝集，判断其血型。ABA标准血清2滴B标准血清2滴受试者的红细胞悬液1滴1滴混匀后1000rpm离心1min或3000rpm离心15秒。取出观察结果:完全凝集:管底部有红细胞的凝块，管底细胞边缘呈花边状，轻弹试管凝块不散；完全不凝:血细胞均匀的沉到管底，边缘整齐，用手轻弹试管，红细胞像一缕烟似的立即上升，随即成为均匀的悬液；轻微凝集:必须将液体转到载玻片上镜检后判定凝集程度。

试管法(反定型)

010203040506AcBc受检者血清2滴2滴2滴5%的A型红细胞悬液1滴5%的B型红细胞悬液1滴立即以1000rpm离心1分钟或3000rpm离心15秒。轻轻扣动试管底部，观察结果----同前正定型反定型结果抗A抗BA型RBCB型RBCO型RBC--+