细菌实验指南.ppt

实验指南 陈东科 第一次实验 1. 示教 （1）?嗜血杆菌：菌落形态、卫星现象（斑点法和纸片法）、溶血现象。 （2）肺炎链球菌：菌落形态、溶血现象、OP试验。 （3）卡他莫拉菌：菌落形态，DNA酶、乙酰酯酶试验。 （4）艾肯菌：菌落形态。 （5）显色培养基菌落形态。 2. 细菌鉴定基本试验操作规范化： 操作规程及实验材料另附。 示教 (1)? CPS ID 3 (43541, 20平板/包装，3盒) 细菌：大肠埃希菌(ATCC25922)（粉红），变形()（浅棕），粪肠(ATCC29212)（天蓝），肺克(ATCC700603)（绿色）混合菌液， 需提前制备，接种 (2)? Candida ID 2 (43631, 20平板/包装，3盒) 细菌：白念(ATCC90029)（蓝色），热念(ATCC201380)（粉红），混合菌液需提前制备，接种 孵育：37度24-48小时 (3)? Rabbit Plasma (55181,24人份/盒，1盒) 细菌：金葡(ATCC25923) 其他：37度水浴，胰酶大豆肉汤， 结果：24小时观察 操作 （1）API NH (10400 , 10条/包装X4，5-6条/组) 细菌：流感(ATCC10211)，或副流感(1946)，淋球菌 其他：4号麦氏标准管，矿物油， 孵育：2小时，判读结果 （2）ATB FUNGUS 2 (14201, 25条/盒，1盒， 4条/组) 细菌：白念(ATCC90029) 其他：0.85% Nacl，2号麦氏标准管，135?l加样枪， 孵育：35度，24小时判读结果 3．ID Catalase (55561 100人份/盒，3 盒) 细菌：葡萄球菌(ATCC25923)，链球菌() 其他：干净玻片， 结果：立即观察 4．Oxidase (55635, 50人份/盒，1 盒) 细菌：大肠埃希菌(ATCC25922)， 绿脓(ATCC27853) 其它：空白纸片或滤纸片 结果：立即观察 第二次实验 1. 示教 菌落形态：继续 示教 (1) CPS ID 3 (43541, 20平板/包装，3盒) 细菌：大肠埃希菌(ATCC25922)（粉红），变形(X27)（浅棕），粪肠(ATCC29212)（天蓝），肺克(ATCC700603)（绿色）混合菌液， 需提前制备，接种 (2)? Candida ID 2 (43631, 20平板/包装，3盒) 细菌：白念(ATCC90029)（蓝色），热念(ATCC201380)（粉红），混合菌液需提前制备，接种 孵育：37度24-48小时 (3)? Rabbit Plasma (55181,24人份/盒，1盒) 细菌：金葡(ATCC25923) 其他：37度水浴，胰酶大豆肉汤， 结果：24小时观察 2. 结果判读： 判读前一天试验结果。 第三次实验 1. 示教 (1) β-内酰胺酶：头孢硝基噻吩（Nitrocefin）纸片法。 (2) 超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）：双纸片协同法和双纸片扩散法（增效法）。 (3) AmpC β-内酰胺酶：双纸片协同法和双纸片扩散法。 (4) Metallo β-内酰胺酶：双纸片协同法（抑制法）。 （5）SSBL测定: 双纸片协同法（抑制法）； ESBL+AmpC=SSBL (Super-Spectrum Beta Lactermbses) （6） E实验：ESBLs，MBL； （7）菌落形态：继续； （8）胆汁溶菌现象； （9）肺炎链球菌乳胶凝集实验。 2. DNA酶、乙酰酯酶检测 （1） DNA酶检测： 将待检菌及阳性对照菌（金葡菌ATCC 25923）点种于DNA琼脂平板上，于35℃孵育箱过夜培养。 （2）乙酰酯酶检测： 将待检菌涂抹予3-乙酰吲哚纸片上，3分钟变兰绿色为阳性。 3. 细菌产酶测定 （1）协同试验 ESBLs： 配0.5麦氏单位的待检菌液，均匀涂抹于MH琼脂平板上，10分钟后与平板中央贴一片阿莫西林/克拉维酸（AMC）纸片，在相距20~25mm处分别贴头孢他啶（CAZ）、头孢噻肟（CTX）、头孢曲松（CRO）、头孢泊肟（CPI）等纸片，于35℃孵育箱过夜培养。 协同试验 AmpC：配0.5麦氏单位的待检菌液，均匀涂抹于MH琼脂平板上，10分钟后与平板中央贴一片邻氯西林纸片（200μg），在相距15~20mm处分别贴头孢西丁（FOX）纸片，于35℃孵育箱过夜培养。 协同试验 MBL：配0.5