冠突散囊菌发酵液对小鼠非酒精性脂肪肝预防作用的实验研究.docx
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冠突散囊菌发酵液对小鼠非酒精性脂肪肝预防作用的实验研究
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通讯作者：谭珊（1981年-），女，湖南长沙人，副主任医师/副教授，长沙医学院附属第一人民医院急诊科医师。
基金项目：长沙医学院大学生创新性课题（长医教[2015]15号-169）
摘要：目的观察不同剂量的冠突散囊菌发酵液对该脂肪肝模型的预防作用，并为冠突散囊菌更广泛的开发利用提供丰富的实验依据。方法：通过建立小鼠高脂性脂肪肝动物模型的方法，将80只小鼠随机平分为8组：正常对照组、高脂对照组、低、中、高浓度（10%、30%、50%）冠突散囊菌发酵液正常预防组、低、中、高浓度（10%、30%、50%）冠突散囊菌发酵液高脂预防组。喂养五周后全自动生化分析仪检测血清中天门冬酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）的含量。并计算肝指数，对肝脏进行病理学检查，观察发酵液对该模型的影响。结果：冠突散囊菌发酵液可以降低脂肪肝小鼠肝指数以及肝组织血清中AST、ALT、TC、TG水平，差异有显著性（P0.05，P0.01），
并能明显改善模型动物肝组织的病理损伤。结论：冠突散囊菌发酵液对小鼠非酒精性脂肪肝有预防作用，浓度越高预防作用越大。
关键词：冠突散囊菌；脂肪肝；预防
脂肪肝是最常见的弥漫性肝病之一，是由多种原因引起的肝脏脂肪代谢紊乱的一种代谢性疾病，主要使肝细胞摄取的脂肪增加而氧化减少所致的肝细胞内蓄积脂肪过多的病理状态[1]。高脂血症为脂肪肝的重要因素，有21~90%的高脂血症患者合并脂肪肝。高脂性脂肪肝是一种全球性疾病，累及多国家、多种族人群。流行病学研究显示，近年来，高脂性脂肪肝发病率呈上升趋势，并且日益年轻化。目前国内外尚无治疗高脂性脂肪肝的理想药物。因此，积极寻找高效、安全、廉价的脂肪肝治疗药物越来越受到关注[2]。
1实验材料
1.1实验动物
小鼠80只，雄性，身体健康，体重18±2g。（由长沙医学院实验动物中心提供），进行分笼饲养，控制温度为（22±2）℃，自然光照，自由进食进水。
1.2饲料
高脂饲料配方：基础饲料79%、猪油20%、胆固醇1%，基础饲料由长沙医学院实验动物中心提供。
1.3实验仪器与试剂
解剖器械、电子天平、搅拌机、电热恒温箱、高压蒸汽灭菌锅光学显微镜、切片机及（ALT、AST、TG、TC）试剂盒（以上由长沙医学院实验室提供），冠突散囊菌（选取安化白沙溪茯砖分离获得）
2实验方法与步骤
2.1PDA液体培养基的制备
将马铃薯洗净去皮称取切块，加适量的水煮沸2min，打浆1min~2min，冲洗打浆机并定容到1000ml，加葡萄糖20g分装，121摄氏度高压灭菌20min待用。
2.2冠突散囊菌发酵液的制备
采用摇瓶发酵培养法：于300ml三角瓶中装入PDA液体培养基，冠突散囊菌（1.5×107CFU/ml）接种培养10%，摇床转速108r/min，28摄氏度震荡培养6天，以3000r/min冷冻离心10min，去上清液，获得PDA发酵液。按上述方法分别接种培养冠突散囊菌，从而获得的低、中、高浓度（10%、30%、50%）发酵液，4℃保存备用。
2.3小鼠分组及实验方案
将小鼠随机分为8组，每组10只，分为正常对照组、高脂对照组、低、中、高浓度（10%、30%、50%）冠突散囊菌发酵液正常预防组、低、中、高浓度（10%、30%、50%）冠突散囊菌发酵液高脂预防组。每天给予高脂组与高脂预防组实验小鼠高脂饲料，每天给予正常组与正常预防组实验小鼠基础饲料，正常组与高脂组给与自来水经口灌胃处理（0.1ml/g），其余实验组给与不同浓度的冠突散囊菌发酵液经口灌胃处理（0.1ml/g），每天三次喂养和药物灌胃。于喂养五周后结束本次实验。
3实验结束
3.1观察
小鼠血压、心率、精神状态、活动情况、食欲、体重的变化等。
3.2检测生化指标
各组小鼠在禁食12h后用乙醚麻醉，摘眼球采血，测其检测血清中AST、ALT、TC、TG的含量，再随机选取小鼠处死，解剖取其肝脏组织称取脏器重量，同时观察肝脏的外形和色泽等变化。计算各组实验小鼠肝脏脏器系数（脏器系数（%）=脏器重量（g）/小鼠体重（g）×100%），并与空白剂量组进行对照。
3.3制作病理切片
取各小鼠相同部位肝组织，用10%甲醛溶液固定，常规方法脱水、浸蜡、包埋，HE染色，光镜观察肝脏组织病理学改变。肝脏病理学染色、切片、拍照和读片将在长沙医学院病理学教研室老师指导下完成。
3.4统计学处理
采用SPSSl3．0软件，计量资料均采用（x±s）表示，两样本均数的比较采用t检验，a=0．05为显著性检验水准。
4结果
4.1小