人骨髓间充质干细胞与成骨细胞共培养诱导破骨细胞方法的建立和鉴定.doc

人骨髓间充质干细胞与成骨细胞共培养诱导破骨细胞方法的建立和鉴定 第33卷第5期 8242007年9月 吉林大学(医学版) JournalofJilinUniversity(MedicineEdition) Vo1.33No.5 Sep.2007 [文章编号]1671—587X(2007)05—0824—03 人骨髓间充质干细胞与成骨细胞共培养诱导破骨 细胞方法的建立和鉴定 梅红,李一雷,王心蕊.,张丽红,刘巍,王建民.,李玉林 (1.吉林大学基础医学院病理生物学教育部重点实验室,吉林长春130021;2.吉林大学人兽共患病研究所 人兽共患病教育部重点实验室,吉林长春130062;3.吉林省中西医结合医院骨科,吉林长春130021) [摘要]目的:建立人骨髓间充质干细胞(hMSCs)与人成骨细胞共培养体系,为人破骨细胞体外培养提供 更完善的方法.方法:采用酶消化法分离流产胎儿头盖骨,获取人成骨细胞,对在体外培养的成骨细胞进行碱 性磷酸酶染色(ALP染色);利用Percoll梯度分离法和贴壁筛选法培养hMSCs,应用流式细胞术检测hMSCs免 疫学表型,对其进行鉴定;将获得的成骨细胞和hMSCs在体外共培养作为实验组,单独培养的成骨细胞作为对 照组;对诱导后的细胞应用抗酒石酸酸性磷酸酶染色(TRAP)进行鉴定.结果:体外分离,培养的hMSCs具 有独特的细胞免疫学表型,即CD73和CD105阳性,CD34和CD45阴性.hMSCs与成骨细胞共同培养5d后, 即可见单个核细胞融合成多核细胞,TRAP染色可见多数细胞胞浆呈酒红色,为诱导成功的破骨细胞. 结论:hMSCs与人成骨细胞共同培养能诱导为具有典型的破骨细胞表型的多核细胞. [关键词]破骨细胞;骨髓间充质干细胞;成骨细胞 [中图分类号]Q813.1[文献标识码]A EstablishmentofmethodtoinduceosteoclaststhroughCO—culture ofhumanbonemarrowmesenchymalstemcellsandosteoblasts MEIHong,LIYi-lei,WANGXin-rui.,ZHANGLi—hong,LIUWei,WANGJian—rain.,LIYu—lin (1.KeyLaboratoryofPathobiology,MinistryofEducation,SchoolofBasicMedicalSciences,JilinUniversity, Changchun130021,China;2.KeyLaboratoryofZoonosis,MinistryofEducation,InstituteofZoonosis, JilinUniversity,Changchun130062,China;3.DepartmentofOrthopedics,Hospitalof IntergrationofTraditionalandWesternMedicineofJinlinProvince,Changchun130021,China) Abstract:ObjectiveToestablishaco—culturesystemofhumanbonemarrowmesenchymalstemcells(hMSCs) andosteoblaststOgethumanosteoclasts.MethodsTheosteoblastswereobtainedwithcollagenaseandthealkaline phosphatasestainingwasusedtOtesttheformofosteoblasts;hMSCswereisolated,cultivatedandproliferatedby Percollgradientcentrifugation.CoculturehMSCsandosteoblastswerecultivatedtogether,andosteoclastswere identifiedwithtartrate-resistantacidphosphatase(TRAP)staining.ResultsHighhomogenoushMSCswere obtainedandafterCO—culturefor5dwithosteoblasts,theyfusedtOformmultinuclearcellclustersinmicrographand werepostiveinTRAPstaining.ConclusionTheCO—culturesystemmethodissuccessfu1.Withthismethod osteoclastscanbeobtainedfromC