KAT7_Wnt_β-catenin信号通路促进肺腺癌转移的机制研究.pdf
目录
英文缩略词对照表1
前言2
1.实验材料与仪器4
1.1实验材料4
1.1.1细胞株与临床组织样本4
1.1.2主要实验试剂与材料4
1.1.3主要抗体6
1.1.4菌株7
1.1.5sh-RNA和质粒7
1.1.6sh-RNA序列7
1.1.7引物序列7
1.2主要仪器设备8
1.3主要试剂配置9
1.3.150×Tris-乙酸（TAE）缓冲液9
1.3.210×PBS缓冲液9
1.3.310×TBS缓冲液9
1.3.41×TBST缓冲液10
1.3.510×电泳缓冲液10
1.3.610×转膜缓冲液10
1.3.7LB液体培养基11
1.3.8LB固体培养基11
1.3.910%SDS溶液11
1.3.1010%过硫酸铵溶液（APS）11
1.3.111MpH8.8Tris-HCL溶液11
1.3.121MpH6.8Tris-HCL溶液12
1.3.135%脱脂牛奶封闭液12
1.3.14琼脂糖凝胶12
1.3.15SDS分离胶和浓缩胶12
2.实验方法13
2.1生物信息学分析部分13
2.1.1TCGA-GTEx数据库13
2.2细胞学实验部分13
2.2.1细胞培养13
2.2.2细胞计数及铺板15
2.2.3细胞总蛋白的提取及制样15
2.2.4蛋白浓度测定（BCA）16
2.2.5蛋白免疫印迹（Westernblot）16
2.2.6细胞总RNA提取18
2.2.7逆转录PCR（RT-PCR）18
2.2.8实时荧光定量PCR（qRT-PCR）19
2.2.9载体构建20
2.2.10转化23
2.2.11质粒抽提23
2.2.12质粒转染24
2.2.13细胞划痕实验25
2.2.14Transwell细胞迁移实验25
2.2.15Transwell细胞侵袭实验26
2.2.16慢病毒介导KAT7基因过表达的构建26
2.2.17克隆形成实验27
2.2.18KAT7过表达病毒侵染及稳转细胞株的筛选27
2.2.19慢病毒介导KAT7基因敲降的构建28
2.2.20免疫共沉淀（Co-IP）28
2.3数据处理29
3.实验结果30
3.1KAT7在肺癌中的表达30
3.2KAT7在LUAD中不同分期的肿瘤组织表达30
3.3KAT7在LUAD患者的临床组织标本中的表达31
3.4KAT7在LUAD细胞系中的表达33
3.5KAT7过表达及敲降LUAD细胞株的构建33
3.6KAT7促进LUAD细胞EMT34
3.7过表达和敲降KAT7对LUAD细胞迁移的影响35
3.8过表达和敲