实验五 流式细胞术检测免疫细胞表面标记.pptx

流式细胞术检测免疫细胞表面标记 ;;;;;;;前向角散射光（FSC）;;散射光信号，散点图 (Dot Plot);;;荧光素的激发和发射光谱 激发光谱（Excitation，Ex） - 是指能特异性地激发某种荧光素的一定波长范围内的 光线，也称为吸收光谱。 - 我们一般标注的是吸收波峰，也就是最大吸收波长： Ex-Max 发射光谱（Emission，Em） - 是指荧光素发射的一定波长范围内的荧光。所有荧光 都是宽谱发射。 - 一般标注的是发射波峰，即最大发射波长：Em-Max;;;;;;Flow Cytometry Applications;;;Annexin V，PI双染法检测细胞凋亡;;;;;;;胞内磷酸化流式Phosflow;Control;CBA是利用一系列荧光强度不同的微球，同时分析样本中 多种可溶性成分的流式检测方法。每个CBA微球有特定的荧 光强度，大小一致，包被有特异性抗体，提供了捕获表面， 有效捕获待测蛋白，再加入荧光标记（PE）的检测抗体，形 成“三明治”夹心复合物进行检??。 ? 多重分析 ? 节约样本 ? 灵敏度高;;;CBA特点;FACS: 配置灵活;真空抽吸系统/上样;;分析小鼠脾脏分离的单个核细胞中CD19、CD4+细胞的比例。 初步学会使用流式细胞术分析细胞的生物学特征 ;每3组7个2mL离心管，全染管×3，单染管×3 (CD19-APC, CD3-PE)，空白管×1； 每管分1mL细胞； 4℃，400g离心5min； 弃尽上清，每管加50μL Fc block彻底悬浮，4℃孵育15min； 每管加10μL对应的抗体稀释液，4℃避光孵育30min（铝箔包好）； 每管加500μL PBS，4℃，400g离心5min； 弃尽上清，每管加500μL PBS悬浮细胞，尼龙膜过滤后流式检测； ;