DB37T4032 非洲猪瘟恒温扩增检测技术规范.pdf
ICS11.220
B41
DB37
山东省地方标准
DB37/T4032—2020
非洲猪瘟恒温扩增检测技术规范
TechnicalspecificationforisothermalamplificationdetectionofAfricanswinefever
2020-07-09发布2020-08-09实施
山东省市场监督管理局发布
DB37/T4032—2020
前言
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。
本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。
本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。
本标准起草单位:山东省农业科学院畜牧兽医研究所、山东师范大学、中国动物卫生与流行病学中
心、山东鼎科检测技术有限公司、潍坊安普未来生物科技有限公司、上海基灵生物科技有限公司、潍坊
汉森生物饲料科技有限公司。
本标准主要起草人:孙文博、吴家强、陈蕾、殷斌、陈智、吴晓东、蒋文明、刘国宪、郑乾坤、李
敏、杜以军、于江、时建立、吴香菊、李俊、丛晓燕、郭立辉。
I
DB37/T4032—2020
非洲猪瘟恒温扩增检测技术规范
1范围
本标准规定了非洲猪瘟病毒(ASFV),英文缩略表见附录D,核酸的重组酶聚合酶扩增(RPA)检测
技术的要求。
本标准适用于非洲猪瘟的快速检测、诊断、检疫、监测和流行病学调查。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
核酸恒温扩增技术是依赖解旋酶解开双链DNA,依赖单链DNA结合蛋白与模板单链结合,使模板处于
单链状态并保护它的完整性。引物与模板杂交,然后在DNA聚合酶的催化下开始扩增。
4试剂或材料
除非另有规定,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂。
4.1水:GB/T6682,一级水。
4.21×PBS溶液(pH值7.4):配制见附录A.1。
4.3核酸提取试剂:
a)蛋白酶K溶液(20mg/mL):配制见附录A.2;
b)10%十二烷基硫酸钠(SDS溶液,pH7.2):配制见附录A.3;
c)Tris平衡酚;
d)三氯甲烷;
e)70%乙醇:配制见附录A.4。
4.4重组酶聚合酶恒温扩增试剂盒。
4.5DEPC水。
4.6恒温扩增检测的引物:恒温扩增检测引物见附录B.1。
4.7无水乙醇。
4.8微量移液器配套的带滤芯吸头。
4.9离心管:1.5mL。
5主要仪器设备
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DB37/T4032—2020
5.1微量移液器:最大量程分别为10μL、20μL、100μL、1000μL。
5.2生物安全柜。
5.3普通冰箱。
5.4涡旋振荡器。
5.5研