原花青素对大鼠脑缺血再灌注损伤抗炎机制研究.docx

原花青素对大鼠脑缺血再灌注损伤抗炎机制研究 原花青素对大鼠脑缺血再灌注损伤抗炎机制研究 【摘要】 目的 研究原花青素（GSP）对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤抗炎作用机制。方法 大鼠脑缺血再灌注模型完成后，缺血2 h再灌注24 h，其中原花青素大剂量组(40 mg/kg)、小剂量组(10 mg/kg)术前7 d分别腹腔注射2 ml/kg GSP，模型组腹腔注射2 ml/kg生理盐水，1次/d，再灌注前15 min加注1次。观察不同剂量的原花青素对脑组织一氧化氮（NO）含量、髓过氧化物酶（MPO）活性和脑组织神经细胞的细胞间黏附分子-1（ICAM-1）蛋白的表达的影响。结果 原花青素可显著减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的行为评分；显著降低脑组织中NO含量和MPO的活性，差异有统计学意义（P　　【关键词】原花青素；脑缺血再灌注损伤；细胞间粘附分子-1；髓过氧化物酶；一氧化氮 　　 　　The study of anti-inflammatory mechanisms of procyanidin on cerebral ischemia reperfusion injury of rats 　　 　　WANG Feng,GUO Jian 　　? 　　【Abstract】 Objective To investigate the Anti-Inflammatory mechanisms of grape seed procyanidin (GSP) on cerebral ischemia reperfusion injury (CIRI) of rats.Methods The model of MCAO was established by intraluminal suture technique.After 2 h of occlusion and 24 h of reperfusion，The high dose GSP (40 mg/kg) group and low dose GSP (10 mg/kg) group.was injected by intraperitoneal injection for 7 days ，and all groups were given a more time in 15 minutes before operation.The contents of NO and activities of MPO in brain tissue of ischemic hemisphere were measured; the expression of ICAM-1 in the cortex were measured by immunohistochemical method.Results The neurological scores of rats treated with GSP was reduced apparently compared with model group rats (P　　【Key words】Procyanidin;CIBI;ICAM-1;NO;MPO 　　? 　　原花青素是一类从葡萄籽中提取出的天然植物多酚化合物，具有极强的抗氧化、清除自由基、抗炎、减轻缺血再灌注损伤[1]降低血小板凝聚[2]等保护作用。本试验研究目的旨在探讨GSP在体内对脑缺血再灌注损（CIRI）伤的保护作用及抗炎机制，从而为临床脑保护药物的研制和开发提供实验依据。? 　　1 材料与方法? 　　1．1 材料 健康Wistar大鼠64只，体质量250~300 g，雄性，由山东鲁抗集团动物中心提供。原花青素：天津尖峰天然产物研究公司（批号：G050804）提供，ICAM-1免疫组化染色试剂盒由武汉博士德生物工程有限公司提供；考马斯亮兰蛋白测定试剂盒，一氧化氮(NO)试剂盒、髓过氧化物酶(MPO)试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。德国贺利氏仪器公司PRIM-R台式高速低温离心机；日本OLYMPUS公司BH-2型生物光学显微镜及照相系统；日本Sanyo公司 MDF-330型立式超低温冰箱等。? 　　1．2 模型制备 采用改良Koizumi法制作大脑中动脉栓塞（MCAO）模型。术前禁食12 h，自由饮水，手术过程中用加热垫和灯泡保持大鼠体温。手术在30 min内完成，缺血2 h后，将栓线抽出再灌注24 h，恢复MCA供血。? 　　1．3 神经功能评分 参考Zea Longa的5分制评分标准。? 　　1．4 标本制备及指标测定 断头取缺血侧的半暗带皮质备用。电子天平称取脑组织块约0．1 g，冰冷生理盐水冲洗残余血液，滤纸拭干，加入Tris缓冲液用玻璃匀浆器制成10%的脑组织匀浆4℃离心3