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Beclin1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

肺癌是发病率较高的恶性肿瘤，在其发生和发展过程中，抑癌基因的失活、细胞

内异常物质和内环境的改变、受损细胞器清除障碍、癌细胞凋亡受阻等因素都可能起

到重要作用，这些过程都有自噬参与。belin1是一种与自噬密切相关的抑癌基因，编

码自噬相关蛋白。belin1在乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌中表达均有缺失[1]，在蛋白

和rna表达水平研究自噬在肺癌中的表达目前鲜见报道。本研究检验了自噬相关基因

belin1在肺癌、癌旁组织、正常肺组织临床标本中的表达情况，并探讨其与肺癌的关

系。

1资料与方法

1.1研究对象和标本采集

选择2006年4月～2006年10月手术切除的非小细胞肺癌标本54例，所有病例

经病理学确诊,术前均未接受放、化疗。每例标本取肺癌组织及相应的近癌旁组织(距

肿瘤边缘1～3)、正常组织(距肿瘤边缘5)各一个样本。54例患者中男39例,女15例。

年龄37～75岁,平均（56.3±8.1）岁。肿瘤组织病理类型均为非小细胞肺癌，其中：

腺癌32例，鳞癌17例，大细胞癌3例，腺鳞癌2例。依据1997年uitn分期:ⅰ期

11例,ⅱ期27例,ⅲa期16例。所取组织标本手术切除后立即用生理盐水洗净血污后

装ep管置液氮罐保存备用。

１．２主要试剂

belin1一抗购于美国santaruse公司，逆转录pr试剂盒(takara公司)和rna试

剂盒（包括了taq酶）购置北京赛百盛基因技术有限公司,belin1引物由上海生工生

物技术有限公司合成。

１.３免疫荧光染色

取各组肺癌组织，冰冻切片（厚度0.1），1/2丙酮+1/2酒精固定5in，0.3％

tritn破膜，加入belin1一抗4℃过夜（1∶200），以pbs代替一抗作为空白对照，

阴性抗体作为阴性对照。pbs漂洗后加兔抗羊iggfit荧光二抗(1∶100)，避光

37℃0.5h。激光共聚焦显微镜下波长为353.6n观察拍照。

１.４rt－pr方法

1.5esternblt检测

１.６统计学方法

采用spss11.5作统计学分析。

2结果

2.1免疫荧光结果

免疫荧光染色显示正常组织和癌旁组织均有belin1表达（表达率100％），见图

1a～，belin1在49例肺癌标本中不表达（90.7%）。不表达的癌细胞呈空泡状未染色

状态，见图1d～f。belin1在肺癌和非癌组织中的表达差异有统计学意义

（χ2=60.9,p=0.00）。

2.2rtpr检测结果

belin1rna表达出现在所有组织中。gapdhrna半定量后belin1rna在肺癌、癌旁、

正常组织的相对表达量分别为1.302±0.074、1.691±0.100、

1.673±0.081(f=6.6,p=0.002)。belin1在肺癌组织和其他组织中表达量差异有统计

学意义,在癌旁组织和正常组织中的相对表达量差异无统计学意义，belin1rna在癌旁

组织和正常组织中的表达量均强于肺癌组织，见图2。

图1belin1在肺癌组织未表达（箭头所示）呈空泡状,正常组织表达良好

图２belin1rna在正常组织、癌旁组织、肺癌组织的表达

２．３esternblt检测结果

肺癌组织中的belin1蛋白低表达（肺癌组织：3.489±1.760；癌旁组织：

5.306±2.755；正常组织：6.329±3.483），癌旁或正常组织中高表达（f＝9.73，

p0.001），相对表达量差异有统计学意义（p＝0.000）（图３）。

图3belin1蛋白在正常组织、癌旁组织、肺癌组织的表达

２.４belin1在不同病理类型和临床分期中表达

在本研究中，nsl的不同细胞病理类型以及临床分期之间，belin1的rna表达以

及蛋白表达差异无统计学意义，见表１。

3讨论

ｂelin１位于人类染色体17q21上,大约有150kb，被认为是一种双等位抑癌基因

（haplinsuffiienttursuppressr），其杂合性缺失是细胞发生恶性转化的原因之一

[2]。据报道75%的人类卵巢癌[3,4]、50%乳