基因工程-复习上课.pptx
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;主要内容;关 注 考 纲;基因工程 ;;一 基因工程的基本工具 ;（一）限制性核酸内切酶（限制酶） ;（一）限制性核酸内切酶（限制酶） ;（一）限制性核酸内切酶（限制酶） ;（一）限制性核酸内切酶（限制酶） ; CGAATTCTA…ACCGGAATTCGAGCTC
GCTTAAGAT…TGGCCTTAAGCTCGAG
;;（二）DNA连接酶 ;（二）DNA连接酶 ;（二）DNA连接酶 ;（二）DNA连接酶 ;（二）DNA连接酶 ;【例】图(a)中的三个DNA片段上依次表示出了EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ
三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图(b)为某种表达载体的示
意图(载体上的EcoR Ⅰ、Sau3A Ⅰ的切点是唯一的)。根据基因工程的
有关知识，回答下列问题：;【例】（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有E.coli
DNA连接酶和T4DNA连接酶，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是
T4DNA连接酶。;（三）载体 ;（三）载??? ;二 基因工程的基本操作程序 ;（一）目的基因的获取;（1）从基因文库中获取目的基因
①基因文库
基因组文库：含有一种生物的 基因
部分基因文库：含有一种生物的 基因
（如：cDNA文库）; ③构建cDNA文库： 法（较原有目的基因 ） ;;④如何从基因文库中获取
根据目的基因的有关信息：如基因的 、
基因的 、基因在染色体上的 、基因的转录产
物 、以及基因的表达产物 等特性来获取
目的基因。;（2）利用PCR技术扩增目的基因
①PCR技术（ ）：在生物 复制
特定 的核酸合成技术。
②用途：短时间内 目的基因。
③原理： 的基本原理
（2n，n为 ）
④前提：一段 目的基因的 ，用于
制备 。; ⑤条件
模板：
原料：
酶：
特殊物质：
其他：;;经观察：得到完整的目的基因至少需要完成 次扩增过程。;【例】（2019全国卷Ⅰ·38）基因工程中可以通过PCR技术扩增
目的基因。回答下列问题。
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因
文库中获得。基因文库包括基因组文库和cDNA文库。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是
解旋酶。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的
模板DNA解链为单链的条件是加热至90~95℃。上述两个解链过
程的共同点是破坏了DNA双链分子中的氢键 。;【例】(2018·江苏高考)为生产具有特定性能的α-淀粉酶，研究人员从某种海洋
细菌中克隆了α-淀粉酶基因(1656个碱基对)，利用基因工程大量制备α-淀粉酶，
实验流程如图。请回答下列问题：
（1）利用PCR技术扩增α-淀粉酶基因前，需先获得细菌的 基因组DNA 。;（一）目的基因的获取;（二）基因表达载体的构建（核心）; 此外，质粒上还具有 ，它是质粒自我复制
的起点。真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基
础上进行过 的。;3.构建过程;;（二）基因表达载体的构建（核心）;【例】用相同的两种限制酶切割;知识延伸;（三）将目的基因导入受体细胞;（三）将目的基因导入受体细胞;①农杆菌特点
a.易感染 植物
b.具有 性（趋向伤口分泌的 化合物）
c.它的 的 可转移至受体细胞，
并 上。
（目的基因是否整合到受体细胞染色
体DNA上是目的基因在受体细胞中
的关键）;②转化过程;②转化过程;（三）将目的基因导入受体细胞; ④转化过程;【例】(2018·全国卷Ⅰ)回答下列问题：
（1）博耶(H. Boyer)和科恩(S. Cohen)将非洲爪蟾核糖体蛋白基因与质粒重组后导入
大肠杆菌细胞中进行了表达。该研究除证明了质粒可以作为载体外，还证明了：(答出
两点即可);
（3）真核生物基因(目的基因)在大肠杆菌细胞内表达时，表达出的蛋白质
可能会被降解。为防止蛋白质被降解，在实验中应选用蛋白酶缺陷型的大
肠杆菌作为受体细胞，在蛋白质纯化的过程中应添
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