人教版 选择性必修3 高中生物 2.2.1动物细胞培养(共26张PPT)2.pptx

动物细胞融合技术与单克隆抗体

1.概念：使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。2.原理：细胞膜具有一定的流动性3.诱导融合的常用方法：PEG融合法电融合法灭活病毒诱导法01动物细胞融合技术概述

19世纪30年代，科学家曾在患肺结核、天花和麻疹等疾病的病人的病理组织中观察到多核细胞。如何解释这一现象？病人体内的病毒等因素诱导了多个体细胞融合形成了多核细胞。动物细胞融合技术概述

病毒紫外线灭活丧失感染活性（不感染细胞）保留融合活性（诱导细胞融合）灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力，但是并不破坏病毒的抗原结构。动物细胞融合技术概述

1965年，研究证实了灭活的病毒在适当条件下确实可以诱导动物细胞融合。灭活病毒诱导细胞融合的原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。动物细胞融合技术概述

4.细胞融合的过程获得分散的细胞(胰蛋白酶处理)↓诱导融合（杂种细胞）物理法：电融合法化学法：聚乙二醇PEG生物法：灭活病毒诱导法5.结果：形成的单核杂交细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息。动物细胞融合技术概述

6.意义：突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能7.应用：（1）细胞融合技术已经成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。（2）利用动物细胞融合技术发展起来的杂交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。动物细胞融合技术概述

1.“灭活病毒”中灭活的具体含义是什么？用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏它们的抗原结构2.灭活病毒诱导细胞融合的原理是什么？病毒吸附在细胞表面，含有的糖蛋白和酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布形成通道通道扩大，细胞膜打开两亲本的细胞核逐渐融合，形成杂种细胞相关信息

植物体细胞杂交动物细胞融合原理细胞融合前的处理方法诱导细胞融合的方法细胞融合成功的标志结果意义细胞膜具有一定的流动性、植物细胞的全能性细胞膜具有一定的流动性用果胶酶和纤维素酶去除细胞壁用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散成单个细胞电融合法、离心法；聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+-高pH融合法PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法再生出细胞壁细胞核的融合获得完整的杂种植株形成杂交细胞，生产细胞产品打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能动物细胞融合植物体细胞杂交

1.早期获得抗体的方法向动物体内反复注射某种抗原，从动物血清中分离所需抗体产量低、纯度低、特异性差缺点：2.单克隆抗体(1)概念：化学性质单一、特异性强的抗体(3)存在的问题：每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体单一B淋巴细胞细胞群选择克隆产生大量纯度高特异性强的抗体B淋巴细胞不可能无限增殖02单克隆抗体（2）理论基础：每一个B细胞只分泌一种特异性抗体

1975年英国科学家米尔斯坦和德国科学家科勒在前人工作的基础上，充分发挥想象力，发明了单克隆抗体的制备技术，于1984年获得了诺贝尔生理学或医学奖单克隆抗体把一种B淋巴细胞与能在体外大量增殖的骨髓瘤细胞融合，所得到的融合细胞就可能大量增殖，产生足够数量的特定抗体。米尔斯坦【英国】科勒【德国】

2.单克隆抗体一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖动物细胞融合杂交瘤细胞动物细胞培养单克隆抗体杂交瘤细胞：既能迅速大量增殖，又能产生抗体（4）单克隆抗体的制备思路单克隆抗体

①请用箭头把代表各图解的字母按单克隆抗体制备过程的顺序连接起来。②B图中注射的物质是什么？其目的是什么？③在获取C步骤杂交瘤细胞的过程中，筛选淘汰了哪些细胞？④D图和G图中细胞有什么特点？⑤在流程图中标出两次筛选，并说明其目的。⑥大量增殖杂交瘤细胞获得单克隆抗体的方法有哪些？⑧本过程利用了哪些技术？⑦单克隆抗体有何特点？单克隆抗体

注射特定的抗原,小鼠脾产生特定抗体的淋巴B细胞多种B细胞培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞将骨髓瘤细胞和B细胞融合多种杂交细胞诱导融合能产生抗体，但不能大量增殖不能产生抗体，但能大量增殖B-B、瘤-瘤、B-瘤融合类型：单克隆抗体

杂交瘤细胞（既可以大量增殖又能产生抗体）抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞（分泌的抗体能和特定的抗原结合）注射到小鼠腹腔内体外培养单克隆抗体第一次筛选：用特定的选择培养基在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长第二次筛选：克隆化培养、抗体检测（可以多次）将抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞在体外大规模培养或者注射小鼠腹腔中增值从细胞培养液或小鼠腹水中获取大量的单克隆抗体