青花椒DNA提取方法的研究开题报告.doc

四川农业大学本科生毕业论文（设计）开题报告 毕业论文（设计）题目 青花椒DNA提取方法的研究 姓 名 年 级 2008级 学 号 开题报告（立题依据、研究的主要内容及预期目标、研究方案、论文进度安排、主要参考文献） 1研究背景及意义 1.1 青花椒的简介 青花椒( Zanthoxylumschi nifolium Sieb.etZucc) 又名香椒子、崖椒、椒、青椒、狗椒,因其果实成熟后为青色而得名。它属于芸香科、花椒属落叶植物,阳性树种[1 ] ,属双子叶主根系植物,但侧根、须根多而发达,是著名的香料、油料树种。它不仅具有汉源贡椒的“纯正麻味”,而且还别具“麻味浓烈”、“气味清香”的特色,其果皮所具有的独特颜色和突出品质,使之深受消费者喜爱。青花椒在我国大部分地区都有分布,随着在各地菜肴尤其是川菜中的广泛使用,原来野生或半野生的青花椒已经在四川、重庆、昆明、贵州、湖南等地大量种植。青花椒是《中华人民共和国药典》所收载的常用中药材,具有温中止痛,杀虫止痒的功能,可用于脘腹冷痛、呕吐泄泻、虫积腹痛、湿疹瘙痒等症状的治疗[ 2 ] 。其树杆材质细腻,可制作手柄、刀柄、木椅、烟斗等工艺家具品。由于青花椒根系发达,固土能力强,因此发展青花椒还可保持水土、绿化环境。 1.2青花椒的发展现状 1.2 DNA的研究意义 随着分子生物学手段的发展,利用分子标记及对青花椒植物叶绿体非编码序列扩增来研究其系统发育及遗传结构的方法逐渐兴起[ 4 ] 。对其自然居群遗传多样性以及种群分化的研究,可以为进一步保护和利用青花椒,提供进化分子遗传学依据[ 5 ] 。提取高质量的基因组DNA,是有效开展分子生物学研究的前提,保证试验结果的重复性[ 6 ] 。PCR分析用的模板DNA纯度要求很高,但由于青花椒的叶片组织细胞内酚类化合物和多糖类物质等次生代谢产物较多,故提取高质量的基因组DNA难度较大[ 7 - 9 ] 。利用改进的CTAB法(十六烷基三甲基溴化铵)和SDS法(十二烷基硫酸钠)分别对青花椒3种植物,即三叶青花椒、五叶青花椒、九叶青花椒的叶片进行总DNA的提取,以期获得纯度高、完整性好的总DNA[15]。 1.3计项目（课题）研究的国内外现状（五号宋体加粗，段前0.5行） 以Prickly ash为目标词应用OVID(世界三大农业文献数据库)-AGRICOLA, AGRIS, ERIC数据库进行摘要的检索，总共有409篇文章。以Prickly ash和DNA为关键词检索共有6篇，以prickly ash DNA extraction method of research和Green prickly ash检索无任何报道。在中文文献数据库以花椒、DNA为检索词未查到任何文章，更不用说青花椒的DNA提取方法的研究。以植物DNA提取方法的研究（1979-2011）检索共有7篇文献，其中以蕨类植物DNA提取方法的研究（CTAB法、改良CTAB法、微量 CTAB法、）和火龙果DNA提取方法的研究（CTAB法、改良CTAB法、SDS法、高盐法、快速提取法）最为具体，通过电泳检测、吸光值A260mm/A280mm比值的大小来分析提取的DNA的浓度和纯度，从而得出适合该植物DNA提取的方法，并为分子标记做好铺垫。 2研究的主要内容及预期目标（小四宋体加粗，段前1行） 2.1设计项目（课题）研究的主要内容（五号宋体加粗，段前0.5行） （1）3个品种的青花椒对同一种方法的差异 （2）比较两种DNA提取方法的优缺点 （3）通过比较DNA的吸光度的范围，得出较优的DNA提取方法 （4）通过实验数据，分析影响DNA提取的主要因子 2.2设计项目（课题）研究的预期目标（五号宋体加粗，段前0.5行） 青花椒含有非常丰富的营养成分和矿质元素，因而难以提取高质量的DNA[10]。试验以青花椒叶片为材料，进行多种DNA提取方法比较研究，并通过琼脂糖凝胶电泳对所提取的DNA样品进行检测，通过比较吸光度的值，找出较优的DNA提取方法，来满足后续分子生物学研究的要求[11]。 3研究方案（小四宋体加粗，段前1行） 3.1设计项目（课题）的研究方法（五号宋体加粗，段前0.5行） 3.11 材料与方法 3．111实验材料 　　试验材料均于2004 年5 月采自天然林, 掌叶木采于广西百色市老山林场, 伊桐和东京桐采于广西木论自然保护区, 肥牛树采于广西天等县。供试样品均为嫩叶, 用硅胶快速干燥。 　 3.112主要试剂 　　高盐溶液: 5mol?L N aCl; 1% B2巯基乙醇; 115%PV P (聚乙烯基吡咯烷酮) 40000。 　 提取缓冲液A: 200 mmol?L T ris2HCl pH 值810; 250 mmol?L N aCl; 5