乳腺癌基因治疗研究进展.ppt

*MTT法检测分析MCF/TRE/tk/Tet-On细胞存活率图4在Dox浓度为1μg/ml时，MTT法检测GCV不同浓度时MCF/TRE/tk/Tet-On细胞存活率的变化第30页，讲稿共65页，2023年5月2日，星期三*Dox浓度对MCF/TRE/tk/Tet-On细胞生长的影响图5GCV浓度为1μg/ml时，不同浓度Dox对MCF/TRE/tk/Tet-On细胞存活数的影响第31页，讲稿共65页，2023年5月2日，星期三*旁观者效应表1MCF/TRE/tk/Tet-On细胞旁观者效应的克隆记数1组(n=4)2组(n=4)3组(n=4)4组(n=4)5组(n=4)6组(n=4)MCF-7100%95%90%75%50%0%MCF/TRE/tk/Tet-On0%5%10%25%50%100%克隆计数(均值±SE)36.0±0.8134.0±0.814.5±0.655.0±0.715.0±0.583.5±0.50第32页，讲稿共65页，2023年5月2日，星期三*可调控性自杀基因乳腺癌动物模型的建立以表达HSVtk基因及调控系统Tet-On的乳腺癌细胞MCF/TRE/tk/Tet-On直接接种SCID小鼠成功建立了可调控性自杀基因乳腺癌动物模型，为探讨自杀基因体外调控机制的研究奠定了基础。第33页，讲稿共65页，2023年5月2日，星期三*SCID小鼠体内成瘤及治疗前后肿瘤大小的变化图6乳腺癌细胞MCF/TRE/tk/Tet-On接种SCID小鼠后，NS组、GCV组、GCV+Dox组SCID小鼠肿瘤体积的变化第34页，讲稿共65页，2023年5月2日，星期三*SCID小鼠肿瘤组织病理学观察图7三组（NS组、GCV组、GCV+Dox组）SCID乳腺癌小鼠经治疗15天后肿瘤组织病理学观察H-E染色（×250）NS对照组;GCV治疗组;Dox+GCV治疗组第35页，讲稿共65页，2023年5月2日，星期三*RT-PCR检测SCID小鼠肿瘤组织HSVtk的表达M123图8RT-PCR检测各组SCID小鼠肿瘤治疗15天后HSVtk的表达M:100bpMarker;1.GCV治疗组;2.Dox+GCV治疗组;3.NS对照组第36页，讲稿共65页，2023年5月2日，星期三*研究背景逆转录病毒载体用于exvivo基因治疗，实际感染效率低。原因:一、感染正在分裂的细胞；二、获得病毒滴度低；三、病毒半衰期短，移动距离有限,在一个半衰期内大多数病毒不能到达靶细胞。重组逆转录病毒介导的HSVtk基因表达及提高逆病毒滴度的初步研究第37页，讲稿共65页，2023年5月2日，星期三*逆转录病毒的纯化将初步浓缩的病毒液经冷冻干燥去除更多的水分，以小体积的缓冲液（DMEM）复溶后－70℃冻存得到浓缩病毒液。第38页，讲稿共65页，2023年5月2日，星期三*产毒PA317阳性细胞克隆筛选培养图14微乒乓感染pRevTRE/HSVtk、pRevTet-On、pRevTRE载体的PA317细胞经潮霉素B、G418筛选2周后形成的抗性克隆(×100)第39页，讲稿共65页，2023年5月2日，星期三*不同培养时间与重组病毒滴度的关系图9不同培养时间对克隆PA317细胞产生重组病毒滴度的测定第40页，讲稿共65页，2023年5月2日，星期三*不同丁酸钠浓度和重组病毒滴度的关系05101520图10不同丁酸钠浓度下对克隆PA317细胞培养30h产生重组病毒滴度的测定第41页，讲稿共65页，2023年5月2日，星期三*SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测有无病毒蛋白表达图11克隆PA317细胞上清SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳M：蛋白质分子标准；Lane1：pRevTREDNA转染PA31730h后细胞上清；Lane2：pRevTRE/tkDNA转染PA