高效液相色谱技术在食品营养中的应用.ppt

关于高效液相色谱技术在食品营养中的应用第1页，共35页，星期日，2025年，2月5日高效液相色谱技术是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱。又因分析速度快而称为高速液相色谱。?高效液相色谱法定义：第2页，共35页，星期日，2025年，2月5日溶于流动相(mobilephase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationaryphase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。原理及应用领域：第3页，共35页，星期日，2025年，2月5日①高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。②高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。③高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng,进样量在μL数量级。④应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。高效液相色谱法特点————“三高一广一快”⑤分析速度快、载液流速快：较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。第4页，共35页，星期日，2025年，2月5日●高效液相色谱法主要类型：液固吸附色谱1液液分配色谱2凝胶色谱4键合相色谱3第5页，共35页，星期日，2025年，2月5日一.液固吸附色谱1.1分离原理液固色谱是基于各组分吸附能力的差异进行混合物分离的，其固定相是固体吸附剂。1.2固定相吸附色谱固定相可以分为极性和非极性两大类。1.3流动相流动相要求：①选用的溶剂应当与固定相互不相溶，并能保持色谱柱的稳定性②选用的溶剂应有高纯度，以防所含微量杂质在柱中积累，引起柱性能的改变。③选用的溶剂性能应与所使用的检测器相匹配，如果使用紫外吸收检测器，就不能选用在检测波长下有紫外吸收的溶剂；若使用示差折光检测器，就不能用梯度洗脱。目录第6页，共35页，星期日，2025年，2月5日市场价格：11000RMB/吨纯度99%以上，含氮量高达66%纯牛奶的蛋白质含量约为2.9%左右，而一般蛋白质含氮量16%。在检出三聚氰胺的产品中，石家庄三鹿牌婴幼儿配方奶粉三聚氰胺含量很高，其中最高的达2563mg/kg，其他在0.09-619mg/kg之间。第7页，共35页，星期日，2025年，2月5日第8页，共35页，星期日，2025年，2月5日二、保健食品中主要功效成分的检测方法及原理第9页，共35页，星期日，2025年，2月5日第10页，共35页，星期日，2025年，2月5日传统测蛋白质的方法—凯氏定氮法是根据测定样品中的含氮量来计算其中的蛋白质的含量：含氮量×6.256.25为蛋白质的含氮系数三聚氰胺事件发生的原因：(1)检测方法的局限性！(2)利益的趋势！(3)科学普及的不足性！第11页，共35页，星期日，2025年，2月5日HPLC法检测功效成分的原理和方法第12页，共35页，星期日，2025年，2月5日●高效液相色谱法的特点:热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。高压高效高速高沸点第13页，共35页，星期日，2025年，2月5日流程及主要部件1.流程第14页，共35页，星期日，2025年，2月5日2.主要部件主要部件之一，压力：150～350×105Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性(1)高压输液泵第15页，共35页，星期日，2025年，2月5日(2)梯度淋洗装置外梯度:利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。