蛋白稀释方法[整理版].pdf

以铜为镜，可以正衣冠；以古为镜，可以知兴替；以人为镜，可以明得失。——《旧唐书·魏征列传》

请教：蛋白浓缩方法

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请教各位高手，我想将细胞培养上清中的蛋白浓缩10倍，但要确保最小的蛋白变性与蛋白丢失，应该采用

什么方法比较好？请不吝赐教，谢谢！

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可以用：超虑；盐析；过离子柱等等，看你的试验条件定咯

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蛋白浓缩方法基本有：

丙酮沉淀法；免疫沉淀法；三氯醋酸沉淀法；硫酸铵沉淀法；（低温）有机溶剂沉淀法；聚乙二醇沉淀法；

超滤法；透析法；离子交换层析和冷冻干燥法……

1，丙酮沉淀法；三氯醋酸沉淀法试验要求的仪器简单，但是常常导致蛋白质变性。

2，免疫沉淀法：得有特异性抗体！

3，硫酸铵沉淀法：利用高浓度盐将蛋白质析出（盐析）

选择硫酸按是因为：盐析有效性，pH范围广，溶解度高，溶液散热少，经济！

4，（低温）有机溶剂沉淀法：强调低温（0-4度以下）是因为10度时蛋白会在有机溶剂中变性，可用乙

醇，丙酮……注意：Mg2+离子，pH值

5，聚乙二醇沉淀法：使用PEG时旨在个别情况下才会是蛋白质稍有变性！他溶解是散热低，形成沉淀的平

衡时间短，通常达到30%时蛋白质就会达到最大量的沉淀！

6，超滤法：主要针对小体积蛋白质溶液（几ml）此法更不易引起变性！不过得有浓缩器，不是哪个实验

室都有的！

7，透析法：主要用于更换蛋白质的缓冲液！的有透析袋！不需要特殊的仪器！

8，离子交换层析：可用阴离子交换树脂进行浓缩！

以铜为镜，可以正衣冠；以古为镜，可以知兴替；以人为镜，可以明得失。——《旧唐书·魏征列传》

9，冷冻干燥法：在冷冻状态下让扬品种的液体升华

具体你的实验应该是做一种分泌蛋白吧？

浓缩后要干什么，需要活性蛋白么？

实验室设备如何，导师经费如何？

这些都要考虑！！

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我用的是硫酸铵沉淀法，物廉价美。

用4度饱和硫酸铵等体积加入收集的上清中，以30000g的速度离心30分钟，弃上清，加入你所需体积的

缓冲液体，在震荡器上使沉淀溶解，再在10000g下离心10分钟取上清分装保存于-80度即可