传代培养技术.pdf

5.5传代培养技术

动物细胞传代培养

传代培养是指将原代培养物分割后重新稀释接种到

两个或多个培养瓶内进行培养。

原代培养的首次传代是非常重要的，是建立细胞系

的关键时期。

一般选择细胞指数生长期进行传代。

细胞传代培养

第一次传代常规传代

原代培养的贴壁贴壁细胞传代悬浮细胞传代

细胞要达到生长

基质的80%表面

面积进行传代

贴壁细胞传代的一般步骤

PBS洗涤加入消化液在倒置显微镜下观

吸去旧液

1~2次解离细胞约3min察，细胞呈圆粒状

贴壁细胞传代的一般步骤

加入适量含血清

吹打悬浮细胞调整细胞密度

培养液终止消化

贴壁细胞传代的一般步骤

分瓶接种CO培养箱中培养

2

悬浮细胞传代

悬浮细胞传代因细胞不贴壁，

传代时不必采用酶消化法，

可直接传代或离心收集细胞

后传代。

悬浮细胞

悬浮细胞传代的一般步骤

培养基平衡至室温吹打悬浮细胞调整细胞密度

悬浮细胞传代的一般步骤

分瓶接种添加新鲜培养基CO培养箱中培养

2

悬浮细胞传代的一般步骤

通常换液时不需要每次都完

全更换成新的培养基，除非

细胞密度非常高或者是培养

基的pH偏酸性（培养基颜色

偏黄）。

如果需要完全更换培养液，

可以将细胞悬液离心，吸弃

旧培养基，再用新鲜培养基

重悬细胞。