日本脑炎病毒NS3蛋白酶活性检测及抑制剂高通量筛选方法.PDF

194 生 物 工 程 学 报 周景云 等/ 日本脑炎病毒NS3 蛋白酶活性检测及抑制剂高通量筛选方法的建立 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn February 25, 2014, 30(2): 194−202 DOI: 10.13345/j.cjb.130235 ©2014 Chin J Biotech, All rights reserved 动物及兽医生物技术 NS3 1,2 2 2 1,2 1,2 周景云 ，汪雪 ，裴超 ，宋云峰 ，陈焕春 1 430070 2 430070 , , , . NS3 . , 2014, 30(2): 194−202. Zhou JY, Wang X, Pei C, et al. Method for Japanese encephalitis virus NS3 protease activity analysis and high-throughput screening assay for inhibitors. Chin J Biotech, 2014, 30(2): 194−202. 摘 要: 日本脑炎病毒 (Japanese encephalitis virus ，JEV) 是单股正链 RNA 病毒，全基因组仅含有一个开 放阅读框，编码一条多聚蛋白前体，病毒编码的 NS3 蛋白酶在 JEV 多聚蛋白加工过程中起着重要作用， 是重要的药物靶标。通过 PCR 扩增了NS2BH-NS3 蛋白酶的编码区，构建了原核表达质粒并转化到大肠杆 菌BL21 (DE3) ，经IPTG 诱导得到可溶性的 NS3 蛋白酶，用镍亲和层析方法进行了纯化。建立了基于荧 光共振能量转移的 NS3 蛋白酶活性检测方法，并确定了最佳的反应条件，对 113 个化合物进行了筛选， 发现其中两个化合物对 JEV NS3 蛋白酶具有一定的抑制活性。本研究为 JEV NS3 蛋白酶的活性研究及抑 制剂筛选提供了一种操作方便、成本低廉的方法。 : 日本脑炎病毒，NS3 蛋白酶，可溶性表达，酶活性，抑制剂高通量筛选 Received: May 6, 2013; Accepted: August 19, 2013 Supported by: National Natural Science Foundation of China (No., National High Technology Research and Development Program of China (863 Program) (No. 2011AA10A212). Corresponding author: Yunfeng Song. Tel: +86-27 Fax: +86-27 E-mail: syf8728@163.com (No. (863 ) (No. 2011AA10A212) 2013-10-11 /kcms/detail/11.1998.Q1835.002.html 周景云 等/ 日本脑炎病毒NS3 蛋白酶活性检测及抑制剂高通量筛选方法的建立 195 Method for Japanese encephalitis virus NS3 protease activity anal