植物单细胞培养题库.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 第二节：细胞悬浮培养 Suspension culture 特点： 细胞可以不断增殖，形成高密度的细胞群体，适于大规模培养； 能够提供大量较为均匀的细胞，为研究细胞的生长、分化创造方法和条件。 必须指出：悬浮培养中既有单细胞，也有细胞团。 概念：是指离体的植物细胞悬浮在液体培养基中进行无菌培养。由愈伤组织液体培养技术发展而来。 1、起始悬浮液的制备 愈伤组织 液体培养基 摇床振荡 悬浮培养 质地疏松，细胞分散程度大； 质地紧密，细胞分散程度小，不适于悬浮培养 转速30-150rpm 防细胞破裂 2、悬浮培养的基本形式 分批培养 连续培养 2-1、分批培养（Batch culture） 2.1.1 含义：将愈伤组织培养在一定容积的密闭容器中进行培养。它是进行细胞生长和细胞分裂的生理生化研究常用的培养方法。 但要进行下一批培养，则生长一定时间后，需要继代转移。 2.1.2 特点 培养基体积固定 培养过程中，细胞生长，其数目 不断发生变化，呈S增长。 必须适当搅拌 2-2 连续培养（Continuous culture) 2.2.1 含义：是相对分批培养而言的。连续培养是采用有效的措施让微生物在某特定的环境中保持旺盛生长状态的培养方法. 2.2.2 特点:：①高效，它简化了装料、灭菌、出料、清洗发酵罐等许多单元操作，从而减少了非生产时间和提高了设备的利用率；②自控，便于利用各种仪表进行自动控制；③产品质量较稳定；④节约了大量动力、人力、水和蒸汽，且使水、汽、电的负荷均匀合理。 第三节 细胞培养实验室器材 简介 1.灭菌设备：高压蒸气灭菌锅 用于培养基、蒸馏水和接种器械的灭菌消毒。 工作原理：在密闭的蒸锅内，0．1MPa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸气温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。 2.接种设备：无菌超净工作台用于培养材料的消毒及接种。使用前，将超净工作台上面的排风和杀菌按钮开启，灭菌15min后，关闭杀菌按钮，打开照明按钮，即可在上面进行操作。 电炉 推车 酒精灯 封口膜 接种器具 灭菌器 培养瓶 3.培养设备①带日光灯的培养架，主要用于接种后材料的培养。 ②恒温箱：又称培养箱，可用于原生质体和酶制剂的保温，也可用于组织培养材料的保存及暗培养。 ③摇床与转床：在液体培养基中，可改善培养基中的培养材料的通气状况。如从疏松的愈伤组织中获得单个细胞。但注意要设定适合的温度及转速。 that‘s all! * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 植物单细胞培养概论 一、植物单细胞培养相关概念 1、植物的单细胞培养： 在适宜的条件下，一个来自已分化的根、茎、叶等组织的细胞，经过离体培养可以发育成同其亲本一样的完整植株。 植物组织培养技术的重要理论基础是植物细胞的全能性 植物的单细胞培养，在无菌和人为控制外因的条件下，培养、研究植物组织器官，甚至进而从中分化、发育出整个植株的技术。 2、愈伤组织： 原指植物体受伤时产生于伤口周围的组织。现多指切取植物体的一部分，置于含有生长素和细胞分裂素的培养液中培养，诱导产生的无定形的组织团块。 3、外植体： 把由活植物体上切取下来以进行培养的那部分组织或器官叫做外植体 愈伤组织例图 二、植物组织培养特点及其意义 特点： ①培养条件可以人为控制 ②生长周期短，繁殖率高 ③管理方便，利于工厂化生产和自动化控制 意义：①研究细胞生理代谢过程及各种影响因子； ②用于植物品种的改良； ③用于植物次生代谢物质的生产 三、细胞培养的主要内容 1、单细胞培养（Single cell culture） 2、悬浮培养（Suspension culture ） 3、细胞培养实验室器材 简介 第一节：单细胞培养 （Single cell culture） 单细胞的分离 单细胞的培养方法 影响单细胞培养的因子 ?单细胞的分离 从外植体中直接分离单细胞 从愈伤组织中分离单细胞 通过原生质体再生法获取单细胞 * 叶片是分离单细胞的最好材料 * 机械法：第一种方法：用刀片刮叶片 第二种方法：叶片研碎、离心 酶解法： 机械法第一种方法： 用刀片刮叶片 撕去下表皮 露出叶肉细胞 用解剖刀刮下细胞 机械法第二种方法：叶片研碎、离心 研碎成粉 加研磨介质 过滤、离心 酶解法 Takebe等（1968）最早报道：用果胶酶处理可以分离大