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探秘辣根过氧化物酶（HRP）标记抗体：解锁化

学发光、酶免检测效能

辣根过氧化物酶（HRP）

HRP简介

辣根过氧化物酶，英文名为“Horseradishperoxidase”，日常多以其缩写“HRP”相称，在酶学分类体系里，被赋予编号EC。

它起源于辣根这种植物（Amoraciarusticana），是从其植株中被成功分离提取而出的一类特殊物质。从化学本质来讲，隶属于过氧化

物酶范畴，且带有铁原卟啉基团这一标志性结构特征，该基团在其发挥酶催化功能的过程中扮演着关键角色。

HRP并非单一的、毫无差别的酶个体，实则是一组同工酶集合体，这些同工酶各自具备酶活性，却又在结构、性质细节上存在些许

不同。在众多同工酶之中，辣根过氧化物酶同工酶C（HRPC）脱颖而出，以占比最高的“优势地位”存在，成为HRP家族里最为

常见、含量最为可观的成员。若探究HRP在辣根植株内的分布规律，会发现其在辣根根部的“富集程度”远超其他部位，根部宛如

一座HRP的“天然宝库”，蕴藏着大量这种具有重要科研与应用价值的酶类物质。

HRP结构

辣根过氧化物酶（HRP）在分子构成层面具备精细且独特的架构，其主要组分涵盖糖蛋白（即酶蛋白部分）与铁(III)原卟啉IX（作

为辅基发挥关键作用）。从多肽链架构视角审视，它呈现为单链多肽形态，链间由四个二硫键稳固维系，以此保障分子结构的完整性与

稳定性。在糖蛋白部分，糖类物质占比处于18%-22%区间，所涉糖类种类丰富多样，包含半乳糖、阿拉伯糖、木糖、岩藻糖、甘露

糖、甘露糖胺以及半乳糖胺等，不过具体的糖类组成配比会因不同的同工酶类型而存在差异，彰显出HRP家族内部的结构异质性。

鉴于HRP的酶蛋白与辅基各自具有独特的光学吸收特性，在紫外波长范畴内，酶蛋白于275nm处迎来最大吸收峰，辅基则在

403nm波长下展现最强吸收效能。基于此特性，在对分离所得的HRP进行纯度评估时，常引入OD403nm/OD275nm的比值指标，

以“RZ（德文ReinheitZahl，即纯度数值之意）”来表征。该比值与HRP纯度紧密关联，呈现正相关态势，通常而言，纯度上乘

的HRP制品，其RZ值能够达到3.0及以上水平；反之，RZ值越低，则预示着酶样本中的杂质成分占比越高，纯度越不理想。

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HRP以同工酶群体形式存在，在其同工酶家族谱系中，HRPC凭借自身最高的含量占比，成为研究焦点，相关结构解析成果颇为

详尽。HRPC作为单亚基糖蛋白，其氨基酸残基数量精准确定为308个，且附带8条糖链修饰，从微观原子、离子层面考量，每分

子HRPC容纳有2个Ca²⁺、1分子铁(III)原卟啉IX辅基，链间由4对二硫键加固联结，综合上述构成要素，推算出其相对分

子质量约为44000道尔顿，进一步细分组成结构权重，多肽链部分约占33890道尔顿，氯化血红素结合Ca²⁺部分约计700道尔顿，

碳水化合物部分则占据约9400道尔顿。现阶段研究已证实，辣根过氧化物酶同工酶类别丰富多样，至少存在7种同工酶变体，它们

的等电点分布跨度宽泛，处于3.0-9.0区间。总体而言，辣根过氧化物酶的作用机制实施流程、酶学反应特性表现以及等电点特性呈

现等诸多方面，均与自身复杂且精妙的分子结构存在千丝万缕的内在联系，结构作为基石，从根本上决定与制约着HRP各项生物学功

能的施展与发挥。

HRP生化/生理作用

辣根过氧化物酶（HRP）具备与过氧化氢（H2O2）高效亲和并结合的特性，二者一经结合形成的[HRP-H2O2]络合物，即拥有

强大的氧化催化能力，能够以众多类型的物质作为氢供体，驱动氧化反应进程。这类氢供体涵盖范围广泛，囊括了芳香族化合物、酚类、

吲哚、胺类以及磺酸盐类等多样化的化学类别。在实际运用场景里，出于