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分子互作蛋白与蛋白、核酸、小分子互作检测技术介绍、应用及资料全面解析.pdf

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分子互作|蛋白与蛋白、核酸、小分子互作检测技术介绍、应用及资料全面

解析

生物分子相互作用的研究对于深入了解生物系统至关重要，也是了解生物过程的基础。蛋白质-蛋白质、蛋白质-核

酸、蛋白质-小分子的互作研究支持着细胞功能研究和疾病治疗发展。在实际的研究过程中，由于实验的样品和目的不

同，会用到的实验技术也不尽相同。本文将从这些技术的原理，实验步骤，技术特点，应用和相关资料等方面为大家做

归纳和介绍。

生物分子互作技术总结

蛋白和核酸相互作用已知蛋白测核酸已知核酸测蛋白

CHIP，RIP，Biacore(SPR)，CUTRUN，CUTTagDNAPulldown，RNAPulldown，Biacore(SPR)，EMSA

蛋白和蛋白相互作用Co-IP，GSTpulldown，Biacore(SPR)，TR-FRET，PLA，YeastTwo-hybrid，BiFC，Proteinmicroarrays，Phage

Display

蛋白和小分子相互作用Biacore(SPR)，BLI，MST，ITC

由于篇幅有限，本文仅对常用的几种技术进行介绍，更多的技术原理和应用请关注我们近期的系列讲座：每周一下

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蛋白和核酸互作全攻略

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蛋白和蛋白互作全攻略

8月19号（周一）1500-1600

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讲座3

蛋白和小分子互作全攻略

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一、蛋白和蛋白相互作用

01Co-IP

原理

免疫共沉淀(CoIP)技术基于抗体和蛋白的特异性亲和作用，通过ProteinA、G琼脂糖珠或者磁珠偶联目标蛋白的特

异性抗体，进而从复杂的样品（如细胞裂解液）中捕获及富集目标蛋白，同时可以测定与目标蛋白相互作用的蛋白或其

它生物大分子。

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技术特点

Co-IP是经典的检测蛋白互作的技术，实验步骤相对简单，不需要用到特殊的仪器设备。由于在细胞内完成，更能

反映蛋白质在天然状态下真实的相互作用。由于沉淀下来的是蛋白复合物，不能证明两个蛋白间有直接的相互作用，可

结合GSTpulldown实验进行检测。

实验步骤

1、样品制备：细胞裂解释放蛋白；

2、免疫沉淀：ProteinA/G琼脂糖珠或者磁珠先和目标蛋白抗体进行孵育，然后加入细胞裂解液；

3、洗杂和洗脱：加入洗涤液进行清洗，去除未结合的杂蛋白。洗脱目标蛋白复合物；

4、结果分析：后续可用WB实验或者质谱实验分析；

应用

1、确定两种蛋白在体内是否结合，一般在后面接WB实验；

2、确定两个蛋白的结合的结构域或者位点，一般结合片段截短或者突变实验；

3、筛选和目标蛋白相互作用的未知蛋白，一般结合质谱实验；