生活饮用水中总大肠菌群测定.pdf
食品微生物
综合技能
生活饮用水总大肠菌群检验
一、实验目的
1.学会生活饮用水总大肠菌群检验方法。
2.学会生活饮用水总大肠菌群检验结果报告方法。
二、实验器材
恒温培养箱、显微镜、双料乳糖蛋白胨培养液、单料乳糖蛋
白胨培养液、伊红美蓝培养基（EMB）、革兰氏染色、无菌生
理盐水、灭菌吸管、灭菌培养皿、酒精灯等。
三、检验标准
限量（MPN/100mL或
项目检验方法
CFU/100mL）
总大肠菌群不应检出GB5750.12
四、实验原理
水中总大肠菌群的数量，是直接反映水源被人畜
排泄物污染的一项重要指标。
MPN（mostprobablenumber）法是统计学和微
生物学结合的一种定量检测法。
待测样品经系列稀释并培养后，根据其未生长的
最低稀释度与生长的最高稀释度，应用统计学概
率论推算出待测水样中总大肠菌群的最大可能数。
五、检验程序
六、实验步骤
1.乳糖发酵试验
取10mL水样接种到10mL双料乳糖蛋白胨培养液中
取1mL水样接种到10mL单料乳糖蛋白胨培养液中
另取1mL水样注入到9mL灭菌生理盐水中
混匀后吸取1mL（即0.1mL水样）注入到10mL单料乳糖蛋
白胨培养液中，每一稀释度接种5管。
六、实验步骤
1.乳糖发酵试验
对已处理过的出厂自来水，需经常检验或每天检验
一次的，可接种5份10mL水样双料培养基，每份接种
10mL水样。
六、实验步骤
1.乳糖发酵试验
检验水源水时，如污染较严重，应加大稀释度
可接种1，0.1，0.01mL甚至
0.1，0.01，0.001mL，每个
稀释度接种5管，每个水样共
接种15管。
接种1mL以下水样时，必须作
10倍递增稀释后，取1mL接种，
每递增稀释一次，换用1支
1mL灭菌刻度吸管。
六、实验步骤
1.乳糖发酵试验
乳糖发酵试验将接种管置36℃±1℃培养箱内，培养24h±2h
如所有乳糖蛋白胨培养管都
不产气产酸，则可报告为总
大肠菌群阴性
如有产酸产气者，则按下列
步骤进行：
六、实验步骤
1.乳糖发酵试验
六、实验步骤
2.分离培养
将产酸产气的发酵管分别转种在伊红美蓝
琼脂平板上，于36℃±1℃培养箱内培养
18h~24h，观察菌落形态，挑取符合下列特
征的菌落作革兰氏染色、镜检和证实试验。
深紫黑色、具有金属光泽
的菌落；紫黑色、不带或
略带金属光泽的菌落；淡
紫红色、中心较深的菌落。
六、实验步骤
2.分离培养
六、实验步骤
3.证实试验
经上述染色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌，同时接
种乳糖蛋白胨培养液，置36℃±1℃培养箱中培养
24h±2h，有产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在。
六、实验步骤
3.证实试验
七、实验结果
根据证实为总大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL水
样中的总大肠菌群最可能数（MPN）值。5管法结果见下表1。
七、实验结果
15管法结果见下表2。稀
释样品查表后所得结果应
乘稀释倍数。如所有乳糖
发酵管均阴性时