DB32T 3372-2018 东方百合脱毒技术规程.docx
ICS65.020.20
B05
备案号：58108-2018
DB32
江苏省地
方标准
DB32/T3372—2018
东方百合脱毒技术规程
Technical
Technicalregulationofvirus-freefororientallily
2018-2-10发布2018-3-10实施
发
发布
江苏省质量技术监督局
I
DB32/T3372—2018
目次
前言 II
1范围 1
2规范性引用文件 1
3术语和定义 1
4脱毒设备（施）及化学试剂 1
5组培室消毒灭菌 1
6种源获取 1
7病毒检测 3
II
DB32/T3372—2018
前言
本标准按GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由连云港市农业科学院提出并归口。本标准起草单位：连云港市农业科学院。
本标准主要起草人：赵统利、孙明伟、邵小斌、朱朋波、汤雪燕、王江英。
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DB32/T3372—2018
东方百合脱毒技术规程
1范围
本标准规定了东方百合脱毒技术的术语和定义、脱毒设备、组培室消毒灭菌、种源获取、病毒检测等技术要求。
本标准适用于具备生物技术条件下的东方百合脱毒技术。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T18247主要花卉产品等级第6部分：花卉种球NY/T1491花卉植物病毒检测规程
NY/T2306花卉种苗组培快繁技术规程
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
东方百合orientallily
由天香百合、鹿子百合、日本百合、红花百合等种与湖北百合的杂种中选育出来的栽培杂种系。
4脱毒设备
4.1组培场地建设
组培实验室应选择安静、清洁、无污染的地方。
4.2洗涤设备
工厂化生产可选用自动洗瓶机，另外配置干燥箱、晾瓶架等。
4.3百合脱除病毒设备
超净工作台、培养箱、解剖刀、镊子、解剖针、解剖镜等。
4.4灭菌设备
高压蒸汽灭菌锅、器械消毒器、紫外灯、烘干箱、微滤孔器等。
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DB32/T3372—2018
5组培室消毒灭菌
按NY/T2306要求进行组培室消毒。
6种源获取
6.1鳞片诱导成鳞茎
6.1.1鳞片选取
选取完整、无病虫害无病斑且周径≥14cm的百合鳞茎，由外向内完整的剥取中层鳞片，流水冲洗净表面泥垢后,用0.2%～0.5%的洗衣粉水冲洗10min，在自来水流水条件下冲洗30min。
6.1.2外植体获取
用75%酒精灭菌30s，再用0.1%的升汞溶液浸泡8min～10min，期间不断进行摇动，使鳞片充分与溶液混合，最后用无菌水冲洗5次～6次。将鳞片外围1mm的部分切除，然后选取外层下部与鳞茎盘相连的部分为最佳外植体横切约为0.5cm厚的小块。
6.1.3诱导与增殖愈伤组织
6.1.3.1愈伤培养基配方
MS+2mg/L6-BA+1mg/L2，4-D+30g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.8～6.0。6.1.3.2鳞片接种
将切好的百合鳞片，将底部切口平放于诱导愈伤培养基上，形成愈伤。
6.1.4愈伤诱导成小鳞茎
6.1.4.1培养基配方
MS+0.5mg/L6-BA+15g/L蔗糖+6.5g/L琼脂，pH为5.8～6.0。6.1.4.2愈伤接种
将鳞片上的愈伤取出并切成黄豆粒大小，平放于诱导愈伤培养基上。6.1.4.3培养条件
愈伤及成鳞茎诱导均放置于培养室中，置于23℃~27℃,进行光照与黑暗比例为16h/8h条件下培养，光照强度为3000lx～5000lx。在培养期间，每隔20d更换一次培养基。
6.2组培鳞茎增大培养
6.2.1组培鳞茎增大培养基配方
MS+1mg/LIBA+60g/L蔗糖+6.5g/L，pH为5.8～6.0
6.2.2小鳞茎接种
将分化的小鳞茎接种到组培鳞茎增大培养基上培养。
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DB32/T3372—2018
6.2.3培养条件
将接种的鳞茎，置于23℃~27℃条件下，暗培养60d即可长成直径大于0.5cm以上的组培鳞茎。在培养期间，每隔20d更换一次培养基。
6.3打破休眠
把增大的组培鳞茎，整瓶转至4℃暗培养的冷藏室内，暗培养60d～80d解除休眠。
6.4热处理
将解除休眠的百合鳞茎，整瓶