ARHGAP30通过PI3K_AKT_mTOR信号通路调控上皮性卵巢癌的机制研究.pdf
摘要
摘要
研究背景和目的：
卵巢癌是目前为止较难早发现且5年生存率很低的妇科恶性肿瘤。由于早
期缺乏有效的筛查手段，上皮性卵巢癌患者的5年生存率大约在47%，主要由
于初次手术不彻底和后期含铂化疗的耐药。ARHGAP30属于RhoGTP酶活化蛋
白家族成员，控制许多信号转导通路真核细胞中的开关，产生多种生物学效
应。研究发现RhoGTP酶中的RhoA与PI3K共同参与了内皮细胞血管增生反
应，并形成病理血管重塑形，近期研究表明ARHGAP30参与肿瘤的进展。已
知约70%的EOC中，PI3K/AKT/mTOR通路被上调，导致与血管生成、细胞
存活和代谢相关的信号通路被过度激活。GEPIA（GeneExpressionProfilingIn-
teractiveAnalysis）生信数据提示ARHGAP30在卵巢癌中异常表达，且在卵巢癌
中高表达。然而，在EOC中ARHGAP30的表达是否存在差异，ARHGAP30的
表达与EOC，EOC与PI3K/AKT/mTOR通路，以及ARHGAP30、EOC、
PI3K/AKT/mTOR通路之间是否有着密切联系？这些是否影响肿瘤的侵袭增殖
和浸润尚不清楚，需要进一步研究。
本实验旨在研究ARHGAP30对人上皮性卵巢癌的影响机制，探讨
ARHGAP30调控PI3K/AKT/mTOR信号通路的具体机制，阐明ARHGAP30与
PI3K/AKT/mTOR信号通路在EOC中相互调控的作用，对EOC治疗提供新的
治疗思路和方向。
方法：
1、qRT-PCR、免疫组化法检测81例EOC组织及其正常卵巢组织中
ARHGAP30的mRNA和蛋白表达水平；
2、qRT-PCR法检测正常卵巢细胞（IOSE80）和上皮性卵巢癌细胞
（SKOV3、OVCAR3和A2780）中ARHGAP30的mRNA的表达情况；设计
ARHGAP30特异性siRNA，分NC组，转染SKOV3、OVCAR3细胞组，RT-
PCR检测其转染效率；
3、在SKOV3、OVCAR3细胞中敲减ARHGAP30后，EdU法检测
siARHGAP30细胞增殖能力；流式细胞仪检siARHGAP30细胞凋亡变化；
II
摘要
Transwell观察siARHGAP30细胞侵袭迁移能力；
4、采用Westernblot检测在SKOV3、OVCAR3细胞中敲减ARHGAP30的
表达后，以及通路抑制剂Buparlisib处理SKOV3和OVCAR3细胞后，
PI3K/AKT/mTOR信号通路关键蛋白（p-PI3K、p-AKT、p-mTOR）的表达水平
变化；
5、采用Westernblot检测敲减ARHGAP30及通路抑制剂Buparlisib处理
SKOV3和OVCAR3细胞后，细胞转移、增殖和凋亡标志物的表达情况；
6、体内验证（动物实验）通过敲减EOC细胞（SKOV3和OVCAR3）中
ARHGAP30的表达后，裸鼠瘤体外观、肿瘤体积、肿瘤重量表达情况。
结果：
1、EOC组织中ARHGAP30的mRNA和蛋白丰度显著高于正常卵巢组织
（P0.01）；
2、EOC细胞（SKOV3、OVCAR3、A2780）中ARHGAP30的mRNA水
平显著高于人正常卵巢上皮