《生物技术制药第四章抗体制药》课件.ppt

第六节 抗体治疗药物 以抗体为载体的导向治疗药物的研究已有近20年的历史，已制备出百余种单克隆抗体，鉴定出数十种与肿瘤相关的抗原，但治疗用的制剂还没有一种达到商品化的程度 主要障碍： ①抗体相对分子量大，穿透力低，不能达到靶部位或靶位摄取量低 ②鼠源性McAb的排异反应 抗体药物研究概况 一、放射性核素标记的抗体治疗药物 抗体作为放射性核素的导向载体，应用比较成功 优点：操作简单、用量小，且能观察到药物在体内的分布和药物动力学， 放射性标记的抗体有较大的杀伤范围，有利于克服肿瘤表面抗原的 异质性，对肿瘤细胞的杀伤也不依赖抗原抗体结合后的吸收作用， 由于分子量小，容易穿透到达肿瘤部位 缺点：有些放射性核素来源困难，且需放射性保护和污染处理 二、抗癌药物偶联的抗体药物 1.常用抗癌药 氨甲喋呤、阿霉素、丝裂霉素、环磷酰胺等 单独使用，肿瘤组织的药物浓度不能保证，且对正常体细胞有杀伤作用；以人血清白蛋白为中间载体，可明显提高每分子抗体所携带的氨甲喋呤量，使体外细胞毒性提高2倍 2.抗体类药物的逆转耐药性 肿瘤细胞对抗原药物可产生多药耐药性（MDR），这种耐药性是受基因调控的，其编码的P糖蛋白可将进入肿瘤细胞的抗癌药物 泵出细胞外，使肿瘤细胞内的药物浓度降低而产生耐药性 将P糖蛋白抗体与抗肿瘤药物偶联制成抗体药物， P糖蛋白抗体虽无杀伤肿瘤的作用，但可与P糖蛋白结合，调节抗癌药物的运转系统，增加细胞内药物浓度，从而增强对肿瘤细胞的杀伤作用 三、毒素偶联的抗体药物 1.免疫毒素及其换代制品 毒素和抗体的交联物称为免疫毒素 ①第一代免疫毒素 含有A、B链的完整的毒素和抗体的交联物。由于B链的存在，第一代免疫毒素只能在体外得到有限的应用 ②第二代免疫毒素 去掉了B链，提高了特异性，在体内有一定抗肿瘤作用，但由于毒素与抗体之间的交联方法复杂、产量低、使用不安全等原因而被弃用 ③第三代免疫毒素——重组免疫毒素 运用基因重组技术对毒素进行改造，除去其非特异性结合部位（B链），降低了毒副作用。其特异性好，稳定性强，渗透性好，免疫原性低，可大量制备 2.免疫毒素的制备 （1）毒素来源：主要是细菌毒素和植物毒素（2）载体种类：①小分子抗体FV和SCFV ②细胞生长因子——可与细胞膜上的受体结合 ③激素——可识别细胞表面的受体 ④CD4——可识别HIV表达的糖蛋白。（3）制备方法：①先克隆出细胞基因，再利用基因重组技术去除毒素中 非特异性结合部位基因 ②将经过改造的毒素基因再与载体基因的cDNA重组 ③将重组体转入受体菌中表达，形成融合蛋白 ④纯化重组免疫毒素 注 意 在PE（绿脓杆菌外毒素）相关的基因融合时，载体cDNA应位于PE基因的5′-端；相反，在用DT（白喉毒素）和PLC（产气夹膜杆菌磷脂酶）制备免疫毒素时，载体基因应置于毒素基因的3′-端 制备免疫毒素的抗体最好属于IgG类，因为IgM类抗体难以与毒素偶联，即使偶联成功，所得的免疫毒素的产量和活性也很低 3.免疫毒素的临床应用 主要用于肿瘤和自身免疫性疾病的治疗 谢谢使用！ 第三节 鼠源性单克隆抗体的改造 1.必要性：目前制备的单克隆抗体都是鼠源性的，大量应用于人体时可产生人抗鼠抗体，使其作用和效果都受到严重影响，甚至有毒副作用 鼠源性McAb存在的问题用分子生物学技术可得到解决；即从基因水平对鼠源性McAb进行加工和改造 2.目的：①降低免疫原性 ②降低相对分子量，增加组织穿透能力 一、改造的必要性和目的 二、抗体的结构及基因组成 （一）抗体的结构（图4-4） 抗体分子的结构是由二硫键连接起来的约4条多肽链 N-端 区段 2条H链：约450~570个aa组成 C-端 区段 N-端 区段 2条L链：约214个aa组成 C-端 区段 Ig分子 aa组成和排列顺序多变，称为可变区（V区） aa组成和排列比较恒定，称为恒定区（C区）