植物组织中丙二醛含量、蛋白质含量及过氧化氢酶活力的测定.doc

《生物化学》实验四 植物组织中丙二醛含量、蛋白质含量及过氧化氢酶活力的测定 学生：蔺秀琴 学号：0812120 指导老师：张芬琴 河西学院生命科学与工程系 08级1班 甘肃张掖 734000 摘要：本文分别以三叶草和草坪草的叶片为材料，分别采用丙二醛法、考马斯蓝法及酶活力测定的方法对三叶草及草坪草叶片内丙二醛含量、蛋白质含量及过氧化氢酶活力进行对比测定。实验结果表明：草坪草内丙二醛含量高于三叶草的，且都在532nm处吸光值最大；三叶草叶片内蛋白质含量高于草坪草叶片的；三叶草叶片酶活力大于草坪草叶片的。以上为我们充分利用其各个器官提供有力依据。 关键词： 三叶草 草坪草 丙二醛含量 蛋白质含量 过氧化氢酶活力 对比 引言：丙二醛 (MDA),无色针状晶体，易潮解，由乙醛和甲酸乙酯在碱作用下缩合而成，主要用于医药中间体，感光色素的原料。与蛋白质不相容，有潜在的致癌性蛋白质（protein）的基础，没有蛋白质就没有生命。由C、H、O、N组成，一般蛋白质可能还会含有P、S、Fe、Zn、Cu、B、Mn、I等。人体内蛋白质的种类很多，性质、功能各异都是由20种氨基酸按不同比例组合而成的，并在体内不断进行与更新时刻处于动态平衡中。 酶活力（enzyme activity）一定条件下，酶活力的大小可用在酶催化某一化学反应的速度来表示，酶催化反应速度愈大，酶活力愈高测定酶活力实际就是测定酶促反应的速度。酶促反应速度可用单位时间内、单位体积中底物的减少量或产物的增加量来表示。一般以测定产物的增量来表示酶促反应速度较为合适摇匀，以1号管为空白对照,在595nm处 试管号 1 2 3 4 5 6 7 8 100ug/ml标准蛋白（ml）0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 样品（ ml）0.2 0.2 0.15mol/L NaCl （ml） 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0.8 0.8 考马斯亮蓝试剂 （ml） 5 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 A595nm?????? 0. 0.137 0.288 0.360 0.524 0.604 图1.321标准蛋白质含量及吸光值曲线 图1.322三叶草与草坪草蛋白质含量 1.33过氧化氢酶活力的测定：如表2所示读取470nm处吸光值。 表1.331溶液配置及其吸光值 试剂 对照管 样品（三叶草） 样品（草坪草） 0.01mol/ml磷酸缓冲液/ml 2.4 2.3 2.3 0.02mol/ml愈创木酚/ml 0.5 0.5 0.5 提取酶液/ml 0 0.1 0.1 过氧化氢/ml 0.1 0.1 0.1 混合后读出OD值，3min后再读出OD值，作差 OD值差 0 0.927 0.236 2结果与分析 1.31结果分析：532 nm处测得吸光值最大；草坪草叶片内的丙二醛含量高于三叶草的。因为草坪草机体内纤维素含量远大于三叶草的而且丙二醛在酸性和高温条件下，可以与硫代巴比妥酸反应生成红棕色的三甲川，其最大吸收波长在532 nm。 1.32结果分析：由图1.322可见，三叶草蛋白含量大于草坪草的，原因可能是叶是光合作用、呼吸作用的主要器官。宽大肥厚的三叶草叶片比窄而薄的草坪草叶片易合成并储存蛋白质。 图1.331三叶草与草坪草酶活力 1.33由图1.331可见，三叶草酶活力大于草坪草的，原因可能是三叶草的蛋白质含量高于草坪草的。 3讨论 机体能通过酶系统与非酶系统产生氧自由基，后者能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化物。氧自由基不但通过生物膜中多不饱和脂肪酸的过氧化引起细胞损伤，而且还能通过脂质过氧化的分解产物引起细胞损伤。故丙二醛的含量常常可以反映机体内脂质过氧化的程度，间接反映细胞损伤的程度。结果显示草坪草丙二醛含量高于三叶草的，故三叶草细胞受损伤的程度大于草坪草的。 酶活力大小的指标是酶的量，温度降低到4℃是酶活力受到抑制，故温度是调节酶活力的因素