CryⅢA基因植物表达载体构建及马铃薯遗传转化.pdf

???— ???? 草 业? 学 报? 第 ??卷 第 ?期? ????年 ?月? ??????????????????????????? ???．??，??．?? ???Ⅲ? 基 因植 物 表 达 载体 构 建 及 马 铃薯 遗 传 转 化? 尤佳? ，张宁?，文义 凯?，吴家和。，司怀军? ，王蒂? ??．甘 肃 省 干旱 生境 作 物 学 省 部 共 建 国 家 重 点 实验 室 培 育 基 地 甘肃 省 作 物 遗 传 改 良与 种 质创 新 重 点 实 验 室 ，甘 肃 兰 州 ??????? ?．甘 肃农 业 大 学 生 命 科 学 技 术 学 院 ，甘肃 兰 州 ??????；?．中国 科 学 院 微 生 物研 究 所 植 物? 基 因组 学 国 家 重 点实 验 室 ，北 京 ???????? 摘 要 ：利 用 ??—??????技 术 将 酶 切 位 点 不 匹 配 、目 的 基 因 内 部 含 载 体 酶 切 位 点 的 ???Ⅲ? 基 因 和 植 物 表 达 载 体? ??????相连接 ，分别成功构建 了组成型启动子 ????????和 马铃薯茎 叶特异表 达启动子 ??—????驱 动的 ???Ⅲ?? 基因植物表达载体 。利用冻融法将 ?个 重组 质粒转入根癌农杆 菌 ???????，转 化马铃薯栽培 品种 陇薯 ?号 和甘农? 薯 ?号获得了转化植株 ，经卡那霉素筛选和 ???检测 ，共有 ??株阳性植株 ?????? 基因成功整合 到马铃薯 基因组? 中 。经 实 时 荧 光 定 量 ??? 检测 表 明 ，???Ⅲ? 基 因在 ????????驱 动 的 ??????? 转 基 因植 株 的 根 、茎 、叶 中 均 有 表? 达 ，且在 叶 中 表达 量较 高 ，茎 和 根 次 之 ；在 马 铃 薯 茎 叶特 异 表 达 启 动 子 ??—???驱 动 的 ???Ⅲ? 转 基 因 植 株 中 ，在 根? 中未 见 表 达 ，仅在 茎 、叶 中表 达 ，且 在 叶 中表 达 量 较 高 。? 关键 词 ：??—??????；???Ⅲ? 基 因 ；表 达 载体 ；马 铃 薯 ；遗 传 转 化? 中 图 分类 号 ：????．??；????．?? 文 献 标 识 码 ：?? 文 章 编 号 ：?????????????????—???????? ???：??．?????／????????????? 马铃 薯 甲虫 ???????????????????????????属鞘 翅 目叶 甲科 ，又 称 马铃 薯 叶 甲或 科 罗拉 多 马铃 薯 甲虫 ?????—? ??????????????????，????，是 国 际公 认 的毁 灭性 检 疫 害 虫 ，也 是 我 国重 要 外 来 入侵 物 种 之一 。因其 具 有 高 繁殖? 率 、滞育 和迁 飞等 习性 ，生态 可塑性 强 ，且 世代 重叠 ，防治 难度 大 ，其 主要 以成 虫和幼 虫取食 叶 片 ，通常 将植 株叶 片? 吃 光 ，仅剩茎 秆 ，其危害 造成 马铃 薯产量 一般损 失 为 ??? ～??? ，严重 者 可 达 ??? 以上 ，甚 至绝 产 。而 且还 可 传? 播 病 害 ，如褐 斑病 、环腐 病 等口??。近年来 我 国检 疫部 门通 过 口岸 检 疫 截获 马 铃薯 甲虫 的频 率 在逐