饲料中泰乐菌素、泰万菌素、替米考星的测定 液相色谱-串联质谱法.docx

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饲料中泰乐菌素、泰万菌素、替米考星的测定

液相色谱-串联质谱法

1范围

本文件描述了饲料中泰乐菌素、泰万菌素和替米考星的液相色谱-串联质谱测定方法。

本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和添加剂预混合饲料中泰乐菌素、泰万菌素和替米考星的测定。

本文件的检出限为0.02mg/kg，定量限为0.05mg/kg。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样中的待测物经乙腈溶液提取，混合型阳离子交换柱净化，用液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。

5试剂或材料

除非另有规定，仅使用分析纯试剂。

5.1水：GB/T6682，一级。

5.2乙腈：色谱纯。

5.3甲酸：色谱纯。

5.450%乙腈溶液：取500mL乙腈，加水稀释至1000mL，混匀。

5.50.1%甲酸溶液：取1mL甲酸（5.3），加水稀释至1000mL，混匀。

5.6磷酸二氢钾溶液（0.1mol/L）：称取磷酸二氢钾13.61g，加水溶解并稀释至1000mL，混匀。

5.75%氨化甲醇：取氨水5mL，加甲醇稀释至100mL，混匀。

5.8标准贮备溶液（1mg/mL）：称取泰乐菌素A（CAS：1401-69-0，含量≥98.0%）、泰万菌素（CAS：63409-12-1，含量≥97.0%）、替米考星标准品（CAS：108050-54-0，含量≥94.0%）10mg（精确至0.01

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mg），用甲醇溶解，分别转移到10mL容量瓶中，用甲醇定容，混匀。－18℃以下保存，有效期3个月。

注：如所用标准品为相应的盐，应折算成有效成份。

5.9混合标准中间溶液（10μg/mL）：准确移取标准贮备溶液（5.8）各1mL于100mL容量瓶中，用甲醇稀释、定容，混匀。－18℃以下保存，有效期3个月。

5.10内标贮备溶液（0.5mg/mL）：称取替米考星-d3（CAS：108050-54-0，含量≥98.0%）5mg（精确至0.01mg）于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，混匀。－18℃以下保存，有效期为3个月。

5.11内标工作溶液（5μg/mL）：准确移取1mL内标贮备溶液（5.10）于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，混匀。－18℃以下保存，有效期为3个月。

5.12混合标准工作溶液：准确移取适量混合标准中间溶液（5.9）和内标工作液（5.11），于容量瓶中，用5%氨化甲醇（5.7）稀释定容，配制成浓度分别为0.5ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL

和100ng/mL，内标浓度均为5ng/mL，混合标准系列溶液。临用现配。

5.13固相萃取柱：混合型阳离子交换填料，60mg/3mL，或性能相当者。

5.14微孔滤膜：0.22μm，有机系。

6仪器设备

6.1液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源。

6.2电子天平：精度为0.1mg和0.01mg。

6.3旋涡混合器。

6.4振荡器。

6.5离心机：转速不低于7000r/min。

6.6固相萃取装置。

7样品

按GB/T20195制备试样，取样品至少200g，粉碎使其全部通过0.425mm孔径的分析筛，充分混匀，装入密闭容器中，备用。

8试验步骤

8.1提取

平行做两份试验。称取试样2g（精确至0.1mg）于50mL离心管中，加入内标工作溶液（5.11）100μL，加入50%乙腈溶液（5.4）10mL，300r/min振荡提取15min，于7000r/min离心5min，移取上清液至另一50mL离心管。残渣用50%乙腈溶液（5.4）10mL重复提取一次，合并两次上清液，混匀。准确移取混合上清液1mL，加入0.1mol/L磷酸二氢钾溶液（5.6）5mL，混匀，备用。

8.2净化

混合型阳离子交换固相萃取柱（5.13）依次用甲醇3mL、水3mL和0