Western Blot技术详解 南京大学--最全.doc
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Western-Blot技术详解(南京大学)--原理-流程-细节-注意事项!史上最全!.pdf
Western Blot
—实验方法和注意事项
南京大学
医药生物技术国家重点实验室
2011-04-11
WB流程
原理
蛋白免疫印迹：
SDS变性不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳。堆积胶（压缩蛋白）+分离胶
（分子筛）
原理：
根据分子量大小分离蛋白。形成的SDS-protein复合物，椭圆棒状，使
泳动率只是分子量的函数。
转
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Western_blot原理和技术.ppt
Western blotting 为什么要作蛋白质印迹实验？ 研究一些体外的蛋白质分子，寻找目的蛋白是否存在样品当中 蛋白质的表达情况，上调或下调表达，在不同的样品中，如疾病和正常的样品之间的表达差异性。 定义： 印迹法（blotting）是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。 1975年，Southern建立了将DNA转移到硝酸纤维素膜（NC膜）上，并利用DNA－RNA杂交检测特定的DNA片段的方法，称为Southern印迹法。 而后人们用类似的方法，对RNA和蛋白质进行印迹分析，对RNA的印迹分析称为Northern印迹法
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Western-Blot详解及问题分析.ppt
张绍进 蛋白质免疫印迹技术及 常见问题分析 Western Blot简介 Western Blot一般流程 Western Blot常见问题分析 Western Blot 简介： 印迹法（blotting）是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。 1975年，Southern建立了将DNA转移到硝酸纤维素膜（NC膜）上，并利用DNA－RNA杂交检测特定的DNA片段的方法，称为Southern印迹法。 而后人们用类似的方法，对RNA和蛋白质进行印迹分析，对RNA的印迹分析称为Northern印迹法，对单向电泳后的蛋白质分子的印迹分析称为Western印迹法，对
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Western_Blot详解及问题分析.ppt
蛋白质免疫印迹技术及
常见问题分析;Western Blot简介
Western Blot一般流程
Western Blot常见问题分析;精品资料;
你怎么称呼老师？
如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你是否会认为老师的教学方法需要改进？
你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？
教师的教鞭
“不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我笨，没有学问无颜见爹娘 ……”
“太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”;Western_Blot详解及问题分析;Western Blot 基本原理;Western Blot 优点;Western_Blot详解及问题分析;Western_Blot详解???问
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蛋白质印迹法-Western-Blot技术详解.ppt
Western blot 实验技术 2012.12.12 Western blot的定义 Western blot的基本原理 Western blot的一般流程 Western blot的常见问题 定义 印迹法（blotting）是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。 Western blot又成蛋白质印迹法，对单项电泳后蛋白质分子的印迹分析称western印迹法，它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法,且能对蛋白进行定性和半定量的分析方法。 基本原理 West
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western blot 实验技术及心得.pdf
W E S T E R N B L O T
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【2017年整理】Western_Blot过程步骤详解.doc
Western Blot详解(原理、分类、试剂、步骤及问题解答)Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术: 一、原理 二、?分类 i.放射自显影 ii.底物化学发光ECL ECF iv.底物DAB呈色 三、?主要试剂 四、?主要步骤 五、?实验常见的问题指南 1.参考书推荐 2.针对样品的常见问题 3.抗体 4.滤纸、胶和膜的问题 5.Marker的相关疑问 6.染色的选择 7.参
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【2017年整理】Western_Blot实验技术.docx
四 川 大 学硕士研究生课程考试试卷名姓陈斌所在院（系、所）生命科学院专 业细胞生物学学号S101671考试课程基因工程原理课程号考试方法试题、综述学分4任课教师冯红考试成绩四川大学生命科学学院制Western blot摘要：本文主要是针对Western blot的原理及操作进行了简单的阐述，Western印迹法是利用抗原抗体的免疫反应，先将蛋白通过SDS电泳分离开来，然后再利用电场力的作用将胶上的蛋白转移到固相载体（NC膜）上，然后再加抗体形成抗原抗体复合物，利用发光或显色原理将结果显示到膜或底片上。同时对Western blot在实际操作中应注意的细节问题进行了归纳以及与其它免疫技
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最全-2013南京大学建筑学考研真题.doc
2014年参考书目
考研经验
南京大学建筑学2010年考研经验总结
南京大学
建筑设计与理论专业
2010年考研经验总结：
（个人观点，望有取有舍，不足之处多多包涵）
?
建筑史：
1 看本校历年真题，在课本上找到出处，并将答案进行总结
2 锁定考点，并将可能考的知识点进行扩充（题看多了，就能发现哪些点容易考，哪些不大会考）
3 有空时看些abbs ，《建筑学报》，《a+d》，《世界建筑》，《建筑细部》等建筑杂志，因为每年的论述题都是今年或近几年的建筑热点话题
4 丁沃沃，赵辰，鲍家声等教授的论文浏览一下，对论述题有用
（个人建议：
A 课本看第一遍时不用过细，大致浏览下即可，知道在讲点
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南京大学结构试卷详解.doc
南京大学结构试卷
1998年
应用一维势箱模型讨论己三烯的∏电子成键问题,设分子的链长为L.
已知 轨道和 轨道的角度函数分别是 , (1)分别绘出 在xy平面上的分布函数,并画出相应的分布图.(2)绘出 在xy平面上的分布函数,并画出在此平面的分布图.
根据分子轨道理论,绘出氢分子离子 的成键分子轨道和反键分子轨道的归一化波函数及其电子云分布函数,并分析指出反键轨道电子云节面的位置.( )
已知Si警惕的结构与金刚石相同,由粉末衍射图测的200衍射峰的衍射角 =32.98°,又测的其密度为203282,求Si晶体的晶胞参数.
1999年
1. 乙烯分子的C=C 链长为
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Western-Blot过程步骤详解中英文对照.docx
实验四
蛋白质印迹分析
【实验目的】
了解蛋白质印迹法的基本原理及其操作和应用。
【实验原理】
蛋白质印迹法又称为免疫印迹法，这是一种可以检测固定在固相载体上蛋白质的免疫 化学技术方法。待测蛋白既可以是粗提物也可以经过一定的分离和纯化,另外这项技术的应 用需要利用待测蛋白的单克隆或多克隆抗体进行识别。
如图所示，可溶性抗原，也就是待测蛋白首先要根据其性质，如分子量，分子大小， 电荷以及其等电点等采用不同的电泳方法进行分离；通过电流将凝胶中的蛋白质转移到聚 偏二氟乙烯膜上；利用抗体（一抗）与抗原发生特异性结合的原理，以抗体作为探针钓取 目的蛋白。值得注意的是在加入一抗前应首先加入非特异性蛋白
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Western-Blot本原理及操作.pdf
Western Blot基本原理及操作
中山医院临床医学研究院
侯嘉云
hou.jiayun@zs-hospital.sh.cn
Michael A. Milhollen, cancer research, 2011
流程
蛋白提取
蛋白提取
蛋白提取
蛋白提取
蛋白提取
蛋白提取
蛋白提取
蛋白提取
蛋白定量
蛋白定量
• 简介
以
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western-blot-教学概要.ppt
单抗 多抗 多克隆抗体 单克隆抗体 来源 小鼠，大鼠，兔子，羊等 鼠源性，兔源性 特点 来源广泛，制备容易 纯度高、特异性强、效价高、少或无血清交叉反应 操作时要使两玻璃对齐，左、右、底三边无间隙，尤其注意底边平齐，以免漏胶。 未聚合的丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺具有神经毒性，可通过皮肤和呼吸道吸收，要带手套并小心操作。 灌胶时开始可快一些，胶面快到所需高度时要放慢速度，操作时胶一定要沿玻璃板流下，这样胶中才不会有气泡。加水或饱和正丁醇液封时要很慢，否则胶会被冲变型。 室温25℃下凝胶完全聚合约需30-60min。 积层/浓缩胶（4%）的配制
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western-blot-教学.ppt
单抗 多抗 多克隆抗体 单克隆抗体 来源 小鼠，大鼠，兔子，羊等 鼠源性，兔源性 特点 来源广泛，制备容易 纯度高、特异性强、效价高、少或无血清交叉反应 操作时要使两玻璃对齐，左、右、底三边无间隙，尤其注意底边平齐，以免漏胶。 未聚合的丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺具有神经毒性，可通过皮肤和呼吸道吸收，要带手套并小心操作。 灌胶时开始可快一些，胶面快到所需高度时要放慢速度，操作时胶一定要沿玻璃板流下，这样胶中才不会有气泡。加水或饱和正丁醇液封时要很慢，否则胶会被冲变型。 室温25℃下凝胶完全聚合约需30-60min。 积层/浓缩胶（4%）的配制
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个人整理 Western Blot.doc
1.提取RNA及用DEPC去除RNase快速的操作，低温环境，少量取上清 主要是抽提之后吸取上清时要特别小心，只要不把蛋白层吸出来就不会有RNase污染。 分子克隆第二版343页,上关于提取RNA所用的玻璃容器的处理方法,是用前180度干烤8小时或更长时间;另一种方法是0.1%的depc水浸泡(37度2小时),然后灭菌水淋洗数次,100度干烤15分钟,然后高压灭菌除去depc.我们实验室一直是用170度考4小时,且不准离人,不准过夜,可能是怕烤箱长时间高温,线路老化会发生危险吧 提取RNA所用的枪头，EP管。直接高压烘干即可。如果用0.1％DEPC处理，要在DEPC配置后振摇1小时后再浸泡