动物细胞融合与单克隆抗体课件-高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx
2.2.2动物细胞融合技术与单克隆抗体
动物细胞融合
扩大培养
既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体
1.若要生产一种只对癌细胞起作用的抗体，应该选哪种抗原蛋白分子？
2.什么细胞能产生抗蛋白4的抗体？它能大量增殖吗？怎样才能获得这样的细胞？
3.什么细胞能无限增殖？
怎样才能获得一种既能分泌特定抗体且无限增殖的细胞？
使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术
细胞膜具有一定的流动性
形成的杂交细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息。
突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能
项目
植物体细胞杂交
动物细胞融合
原理
细胞融合前的处理方法
诱导细胞融合的方法
细胞融合成功的标志
主要用途
意义
细胞膜具有一定的流动性、植物细胞的全能性
细胞膜具有一定的流动性
用果胶酶和纤维素酶去除细胞壁
剪碎+胰蛋白酶或胶原蛋白酶
使细胞分散成单个细胞
电融合法、离心法；
PEG、高Ca2+-高pH融合法
PEG融合法、电融合法
灭活病毒诱导法
再生出细胞壁
细胞核的融合
获得完整的杂种植株
主要用于制造单克隆抗体
打破生殖隔离，实现远缘杂交育种
突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能
融合的具有同种核的细胞、
单克隆抗体
给小鼠注射特定抗原
脾中提取
多种B淋巴细胞
骨髓瘤细胞
未融合亲本细胞、
杂交瘤细胞
多种杂交瘤细胞
产生所需抗体的杂交瘤细胞
融合
筛选1
筛选2
体外培养
注射到小鼠腹腔内
方法：
方法：
PEG、电融合、灭活病毒
细胞膜的流动性、细胞增殖
动物细胞融合技术
动物细胞培养技术
选择培养基
克隆化培养、抗体检测
从腹水中提取
从培养液中提取
1.给小鼠特定抗原的目的？
2.如果要从小鼠脾脏中获得更多产生特定抗体的B淋巴细胞，可以怎么做？
3.为什么从小鼠脾中提取的B淋巴细胞有多种而不是一种？
4.如果只考虑细胞间的两两融合，融合体系中有几种细胞？为什么？
5.第一次筛选的方法，选出杂交瘤细胞是一种还是多种，为什么？
6.第二次筛选的方法，目的是要得到什么细胞？
7.大规模的生产单克隆抗体的方法有几种？注射到小鼠腹腔中有什么优点？
诱导小鼠产生分分泌特定抗体的B淋巴细胞
反复给小鼠注射特定抗原
小鼠接触过多种抗原，产生了多种B淋巴细胞
5种
细胞融合是随机的，且融合率达不到100%
选择培养基；
克隆化培养+抗体检测；
小鼠接触过多种抗原，脾中提取的B细胞多种，诱导形成了多种杂交瘤细胞
产生所需抗体的杂交瘤细胞
融合的具有同种核的细胞、
单克隆抗体
给小鼠注射特定抗原
脾中提取
多种B淋巴细胞
骨髓瘤细胞
未融合亲本细胞、
杂交瘤细胞
多种杂交瘤细胞
产生所需抗体的杂交瘤细胞
融合
筛选1
筛选2
体外培养
注射到小鼠腹腔内
方法：
方法：
PEG、电融合、灭活病毒
选择培养基
克隆化培养、抗体检测
从腹水中提取
从培养液中提取
优点：
未融合的亲本细胞和同种核融合的细胞都会死亡。
原理：抗原抗体特异性结合
操作简单，不需要培养培养基，
对环境要求低。
（可进行多次）
选择培养基—杂交瘤细胞
【第一次筛选】
知识拓展
全合成途径（D途径）：
补救合成途径（S途径）：
糖、氨基酸
H、T
核苷酸
DNA
酶
克隆化培养、抗体检测—产生所需抗体的杂交瘤细胞
【第二次筛选】
知识拓展
脾B淋巴细胞
骨髓瘤细胞
原理：抗原抗体特异性结合
（可进行多次）
抗体1
抗体2
抗体3
抗体4
产量低、纯度低、特异性差
准确识别抗原细微差异、
与特定抗原特异性结合、
可以大量制备。
血清分离抗体：
单克隆抗体：
运载药物
抗体：特异性识别抗原，起到靶向运输作用
药物：发挥治疗作用，杀死靶细胞
诊断试剂
本节小结
细胞膜具有流动性
物理法、化学法、生物法
获取已免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞→融合、筛选→杂交瘤细胞→动物细胞培养→提取单克隆抗体
运载药物；诊断试剂;治疗疾病。