恒温扩增-实时荧光法甲型乙型流感病毒核酸检测标准操作程序.docx
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恒温扩增-实时荧光法甲型/乙型流感病毒核酸检测标准操作程序
（依据WS/T227-2024临床检验项目标准操作程序编写要求）
1承担部门
XX市中心医院检验科PCR组。
2检验目的
用于辅助诊断是否感染甲型流感感毒（FluA)、乙型流感病毒（FluB)。
3原理和方法
试剂盒中的Flu-检测管，管内设置多个疏水分隔层，将管内的裂解液、清洗液和反应液进行隔离。通过外部仪器的加热控制，提取液在高温下化学裂解检测样本并释放出核酸。通过外部仪器磁导作用，使得检测用的样本核酸分别穿过不同液体层，最后核酸在管腿中被洗脱下来，发生扩增反应，从而实现“一管式”的全自动核酸分析即在一个密闭检测管内完成裂解结合、清洗、洗脱和扩增反应。
Flu-检测管预装有核酸纯化试剂、核酸洗脱试剂和交叉引物恒温扩增试剂。上机前，用户只需加入Flu-RNA提取液和待测样本，在适用仪器控制下就能自动完成样本中核酸的提纯，提纯后的核酸与扩增检测试剂被适用仪器混匀加热后进行扩增，同时荧光探针与靶标发生特异性结合产生荧光信号。适用仪器采集荧光信号并自动判定检验结果。
4性能特征
4.1对国家参考品的检测：按照流感病毒核酸检测试剂国家参考品使用方法操作进行检测：
4.1.1检测国家阳性参考品，阳性符合率100%。
4.1.2检测国家阴性参考品，阴性符合率100%。
4.1.3检测国家精密性参考品，结果均符合相应要求。
4.1.4检测国家最低检出限参考品，结果均符合相应要求。
4.2最低检出限：本试剂盒对人咽拭子样本中甲型流感病毒、乙型流感病毒的最低检出限均为500copies/mL。
4.3对企业参考品检测的符合情况：
4.3.1阴性参考品符合率：检测企业阴性参考品，检验结果均为阴性，符合要求。
4.3.2阳性参考品符合率：检测企业阳性参考品，检验结果均为阳性，符合要求。
4.3.3重复性参考品符合率：检测企业重复性参考品，检验结果均为阳性，符合要求。
4.4精密度：对中阳性、弱阳性以及阴性样本进行20天、2人、3批次试剂检测，批内、批间重复性，日内、日间重复性，室间重复性，操作者间重复性均良好，符合率100%。
5标本类型
5.1咽拭子样本。
5.2样本采集：用植绒拭子擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子头浸入含采样液的管中，尾部弃去，旋紧管盖。
5.3样本储存：咽拭子样本应尽快进行检测。如果不能立即送检，应将样本置于采样液中，2℃～8℃冷藏不超过5天，室温放置不超过24小时，-25℃～-15℃保存不超过6个月，长期保存请置于-60℃及以下，反复冻融不超过3次。
6患者准备
采样前2小时避免进食、喝水、吸烟、嚼口香糖等，以防影响结果。采样前可漱口，但不要使用漱口水或药物。
7容器和添加剂类型
选择具有病毒灭活功能如含胍盐（异硫氰酸胍或盐酸胍等）或表面活性剂的采样管。首选含胍盐的采样管。
8仪器和试剂
8.1仪器：杭州优思达生物技术有限公司UC0108型核酸扩增检测分析仪。
8.2试剂：杭州优思达生物技术有限公司UC0108型核酸扩增检测分析仪配套试剂：甲型\乙型流感病毒核酸检测试剂盒。
8.2.1试剂盒组成及成分见下表：
试剂盒组成及主要成分
序号
组分名称
规格
主要成分
1
Flu-检测管
1测试/管
特异性引物和探针、脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)、DNA聚合酶、逆转录酶
2
Flu-RNA提取液
1测试/管
胍盐、磁珠
3
Flu-阳性对照
1管
含靶标片段
4
Flu-阴性对照
1管
不含靶标片段
注：不同批号试剂盒中各组分不能互换混用。Flu-阳性对照或Flu-阴性对照使用前需加入1.2mL的样本保存液进行复溶使其完全溶解。
8.2.2试剂盒储存条件及有效期：2℃～8℃保存，有效期为12个月。
8.2.3试剂盒运输条件：本试剂盒正面朝上放入AB瓦楞纸箱(外包装箱)中，在-25℃～37℃运输7天不会影响产品性能。
8.2.4试剂盒生产日期及失效日期：见标签。
8.2.5试剂盒适用仪器型号：UC0102，UC0108。
9环境和安全控制
咽拭子标本中存在潜在的生物危害因子，个人防护和废弃物处理详见《生物安全手册》（编号：PJDEYY-SWAQ-AQSC06）。
10操作步骤
步骤
操作
图示
1
试剂准备：从试剂盒中取出对应样本数量的RNA提取液和检测管，震荡器充分混匀RNA提取液3秒～5秒后，将管内液体直接倒入检测管中。
2
加样：轻轻混匀拭子样本溶液后，吸取500μL加入检测管，并旋紧管盖。轻摇检测管混匀样本与磁珠提取液，上机检测。
3
仪器准备：打开仪器右侧电源开关，等待仪器自检结束后输入账号和密码，进入检测界面。
4
UC0108型核酸扩增检测分析仪共有8个检