细菌典型生理生化鉴定技术.ppt

2、试验方法吸取草酸钾血浆0.2mL(0.01g草酸钾加5mL兔血浆混匀，经离心沉淀，吸取上清液)，加入0.8mL生理盐水，混匀后，再加入待检菌36℃下培养18-24h肉汤培养物0.5mL和0.25％氯化钙0.25mL，混匀，放37℃水浴中，2min观察一次。第95页，共147页，星期日，2025年，2月5日待血浆凝固后继续观察并记录溶化时间。如2h内不溶化，继续放置24h后观察。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用已知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。第96页，共147页，星期日，2025年，2月5日3、结果观察与记录如凝块全部溶化,为阳性+，凝块24h仍不溶化,为阴性-第97页，共147页，星期日，2025年，2月5日（三）卵磷脂酶试验1、原理：某些微生物能产生卵磷脂酶，在钙离子存在时，能迅速分解卵磷脂，生成不溶性甘油酯和水溶性磷酸胆碱，在卵黄琼脂平板上菌落周围形成不透明的乳浊环或混浊白环，或使血清、卵黄液变混浊，以此鉴别细菌。第98页，共147页，星期日，2025年，2月5日2、试验方法（1）卵黄平板法：A法：将待检菌培养物划线接种或点种于卵黄琼脂平板上，36±1℃培养3～6h，观察结果。第99页，共147页，星期日，2025年，2月5日菌落白色混浊环，第100页，共147页，星期日，2025年，2月5日B法：先用卵黄磷脂酶抗血清将平板涂一半，置于36℃待干后，将待检菌接种于未涂抗血清的一半卵黄琼脂平板上，再转划已涂过抗血清的一半，36±1℃厌氧培养24～48h，观察结果。在未涂抗血清的一半平板上，菌落周围形成较大的不透明乳白色混浊区，在涂抗血清的一半平板上，菌落周围无不透明混浊区，为阳性。两边均无不透明区，为阴性。第101页，共147页，星期日，2025年，2月5日菌落周围无混浊白环菌落周围有混浊白环乳糖卵黄琼脂平板,借以确定该菌可否产生卵磷脂酶。卵磷脂酶具抗原性，其活性可被相应抗血清所抑制，第102页，共147页，星期日，2025年，2月5日（2）卵黄盐水法将庖肉培养基培养物经除菌过滤，收集滤液。在两支灭菌试管内，每管加入1%卵黄盐水0.4mL,在一管中加入滤液0.2mL，另一管加入生理盐水0.2mL作对照。在36℃水浴中，经2h、4h、8h、24h观察结果。管底发生混浊沉淀，对照管无沉淀者，为阳性。第103页，共147页，星期日，2025年，2月5日3、结果观察与记录菌落周围形成较大的不透明区，为阳性。两边均无不透明区，为阴性。管底发生混浊沉淀，对照管无沉淀者，为阳性两管无沉淀者，为阴性。第104页，共147页，星期日，2025年，2月5日（一）枸橼酸盐利用试验

1、原理：某些细菌能利用柠檬酸盐作为唯一碳源，分解枸橼(柠檬)酸盐生成碳酸盐；同时分解培养基的铵盐生成氨，使培养基变为碱性，使指示剂溴麝香草酚蓝由淡绿转为深蓝色，为阳性。第63页，共147页，星期日，2025年，2月5日2、试验方法挑取待检菌，在西蒙柠檬酸盐培养基斜面上密集划线接种，在36±1℃培养1~4天，每天观察结果。第64页，共147页，星期日，2025年，2月5日3、结果观察与记录斜面有菌苔生长，培养基斜面变为蓝色或深蓝色，为阳性，记+；无菌苔生长，培养基斜面仍为绿色者，为阴性，记-第65页，共147页，星期日，2025年，2月5日柠檬酸盐试验原理及斜面照片阳性+第66页，共147页，星期日，2025年，2月5日（二）丙二酸盐利用试验1.原理:某些细菌可以利用培养基中的丙二酸盐作为唯一碳源,丙二酸盐被分解成碳酸钠,使培养基变为碱性,培养基由草绿色变成蓝色，为阳性，以此鉴别细菌。第67页，共147页，星期日，2025年，2月5日2、试验方法取待检菌新鲜纯培养物，接种于丙二酸钠培养基上，于36±1℃培养48h，观察结果。第68页，共147页，星期日，2025年，2月5日3、结果观察与记录培养基由草绿色变成蓝色,为阳性,记+;培养基无颜色变化,为阴性,记-第69页，共147页，星期日，2025年，2月5日五、呼吸酶类试验氧化酶试验过氧化氢酶试验硝酸盐还原试验氰化钾试验第70页，共147页，星期日，2025年，2月5日（一）氧化酶试验1.原理:氧化酶使细胞色素C氧化后，