6.2 真核生物的转录起始-特异诱导性转录因子的作用模式.pdf

真核生物的转录起始-

特异诱导性转录因子的作用模式

罗杰

华中农业大学

DNA结合域和转录激活域的独立性

RogerBrentMarkPtashne

转录激活域fromGAL4protein(yeast)

+

DNA结合域fromLexArepressor(E.coli)

chimericfactor

构建三种重组质粒转入酵母(Y2H)

GAL1operator

UASGLacZasreporter

GAL4转录激活域GAL1operator

LexDNA结合域LacZasreporter

GAL1operator

LexALacZasreporter

嵌

合

转GAL4+UASenhancingGAL1LacZ

录

因

子NoactivatornoLacZexpressing

的

活

性

LexA+LexAopGAL4activationGAL1LacZexpressing

转录激活域和DNA结合域可彼此独立发挥作用！

激活域的功能

招募RNA聚合酶结合到启动子上

GAL1operator

LexALacZasreporter

酵母双杂交技术将研究的cDNA与AD／BD分别构建两个表

2达载体转化酵母测验体系

YHassay

reporter

转录因子

Xp与Yp相互作用

筛选与Z蛋白相互

作用的D蛋白

通过X-gal，检测报告基因Lac-Z表达水平

Cell89(2may)1997

Trans-factor与cis-factor结合的通用原则

⚫特异位点间形成氢键的位点专一性结合

•Trans因子-Cis因子间的

识别与结合多发生在具有

与构型相关

足够信息的DNA的大沟内

与DNA结合•蛋白质氨基酸与DNA碱基

氢键结合