血浆IgM和IgG抗体磁微粒化学发光法检测程序.docx

血浆IgM和IgG抗体磁微粒化学发光法检测程序

一、样本采集与处理

1.样本采集

使用无菌真空采血管采集静脉血。成人通常采血量为3-5ml，儿童根据年龄和病情适当调整，一般不少于1ml。采血过程严格遵循无菌操作原则，避免样本污染。采血后将血液标本轻轻颠倒混匀，防止血液凝固。

2.样本处理

将采集好的血液标本室温放置30-60分钟，待血液自然凝固。然后以3000r/min离心10-15分钟，分离出血浆。分离后的血浆应尽快用于检测，如不能及时检测，可将血浆转移至无菌的离心管中，-20℃保存，保存时间不宜超过1个月。如需长期保存，可置于-80℃冰箱。

二、试剂准备

1.从冰箱中取出磁微粒化学发光检测试剂盒，包括磁微粒混悬液、酶结合物、发光底物A液和B液、校准品、质控品等，放置在室温平衡30分钟。

2.检查试剂的有效期和外观，如有试剂过期、变质、变色、混浊等现象，不得使用。按照试剂盒说明书的要求进行试剂的复溶和稀释，例如校准品和质控品需用指定的稀释液进行复溶，轻轻颠倒混匀，避免产生气泡。

三、仪器准备

1.打开磁微粒化学发光检测仪，预热30分钟，使仪器达到稳定的工作状态。

2.检查仪器的管路是否通畅，清洗液和废液瓶的液位是否合适，如有需要，及时添加清洗液或倒掉废液。对仪器进行自动校准和性能验证，按照仪器操作手册的步骤进行操作，确保仪器各项参数符合检测要求。

四、检测操作步骤

1.编号：将样本、校准品和质控品分别对应排序并编号，记录好样本信息和对应的检测管编号。

2.加样：使用加样器准确吸取50μl血浆样本，加入到相应编号的检测管中。按照相同的方法依次加入校准品和质控品，每加完一个样本或试剂后，更换加样枪头，避免交叉污染。

3.加磁微粒混悬液：使用移液管向每个检测管中加入100μl磁微粒混悬液，磁微粒表面包被有针对新型冠状病毒的抗原，能与血浆中的IgM和IgG抗体特异性结合。加入后轻轻振荡混匀，使样本和磁微粒充分接触。

4.孵育：将检测管放入孵育器中，在37℃孵育30分钟，使磁微粒与抗体充分结合形成免疫复合物。孵育过程中保持孵育器的温度恒定。

5.清洗：孵育完成后，将检测管放置在磁粒分离架上，静置2-3分钟，使磁微粒吸附在管壁上。然后吸弃上清液，使用清洗液冲洗检测管3-4次，每次清洗后都要吸净清洗液，以去除未结合的物质。

6.加酶结合物：向每个检测管中加入100μl酶结合物，酶结合物是标记有酶（通常为碱性磷酸酶）的抗人IgM和IgG抗体，能与免疫复合物中的抗体结合。加入后轻轻振荡混匀，再次放入37℃孵育器中孵育30分钟。

7.再次清洗：孵育结束后，重复清洗步骤，以去除未结合的酶结合物。

8.加发光底物：向每个检测管中依次加入50μl发光底物A液和50μl发光底物B液，发光底物在酶的催化下会产生化学发光反应。加入后立即将检测管放入磁微粒化学发光检测仪中进行检测。

五、结果判读

1.校准曲线制备

使用校准品进行检测，将校准品的浓度和对应的发光强度值输入到仪器软件中，仪器自动绘制校准曲线。校准曲线应符合试剂盒说明书的要求，线性相关系数通常应≥0.99。

2.样本检测结果计算

仪器根据校准曲线自动计算出样本中IgM和IgG抗体的浓度值。检测结果以浓度值或单位表示，同时给出阴阳性判定结果。一般来说，当样本中IgM或IgG抗体浓度高于试剂盒设定的临界值时，判定为阳性；低于临界值时，判定为阴性。

3.结果审核

检测人员在审核检测结果时，首先要查看质控品的检测结果是否在允许的范围内。如果质控品结果失控，应查找原因，如试剂是否异常、操作是否规范、仪器是否故障等，重新进行检测。对于阳性样本，应进行重复检测确认，并做好记录。同时，结合患者的临床症状、流行病学史等信息进行综合分析。

六、质量控制

1.每批次检测都应同时进行室内质控，使用至少两个不同浓度水平的质控品（如正常水平和临界水平）。质控品应定期从正规渠道购买，按照说明书要求保存和使用。

2.绘制质控图，将每次质控品的检测结果记录在质控图上，观察质控值的变化趋势。如果质控值连续超出±2s范围或出现明显的漂移、趋势变化，应立即采取措施进行处理，如重新校准仪器、更换试剂等。

3.参加室间质量评价活动，定期将检测样本送至权威机构进行比对，与其他实验室的检测结果进行比较，评价本实验室检测结果的准确性和可靠性。

七、检测后处理

1.检测完毕后，将剩余的试剂按照说明书的要求进行妥善保存。已使用过的校准品、质控品、样本等废弃物，应按照生物安全的相关规定进行处理，一般采用化学消毒剂浸泡后高压灭菌处理。

2.对仪器进行清洗和维护，按照仪器操作手册的步骤进行关机操作。关闭仪器电源后，做好仪器的清洁工作，擦拭仪器表面，清理管路中的残留液体，防止管路堵塞。

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