《农产品质量安全检测技术培训系列之.pptx
农残检测常用方法技术要点
卞红正
安徽省农产品质量安全检测中心
农业部农产品质量安全监督检验测试中心（合肥）
★农产品质量安全检测技术系列之
主要内容
前言
1
2
国家标准化管理委员会颁布国家标准（GB）;
农业部颁布行业标准（NY）;
国家进出口商品检验检疫总局颁布行业标准，编号为SN。
以前农残检测方法的颁布：
截至目前，已颁布的农产品和食品农药残留检测方法标准共有390多个。其中：国家标准92个，农业行业标准35个，商检行业标准约270个。
已颁布标准
前言
根据2009年6月1日实施的《中华人民共和国食品安全法》第二十一条和第二十二条的规定，今后凡涉及食品安全的标准（八个方面），统一由国务院卫生行政部门部制定和颁布，国务院标准化行政部门提供国家标准编号。
对现行的食用农产品质量安全标准、食品卫生标准、食品质量标准和有关食品的行业标准中强制执行的标准予以整合，统一公布为食品安全国家标准。
农残检测方法标准全部统一为食品安全国家标准。
当前常用检测方法
一、当前常用检测方法
二、速测方法
1．快速检测程序
二、速测方法
GB/T5009.199-2003
NY/T448-2001
适用
范围
蔬菜（葱蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇和番茄含有抑制酶的植物次生物质，易导致假阳性；叶绿素高的也会干扰，这两类可整株取样）
适用叶菜(除韭菜)、果菜、豆菜、瓜菜、根菜(除萝卜、茭白等)
方法
速测卡法(纸片法)和酶抑制率法(分光光度法)
酶抑制率法(分光光度法)
波长
412nm
410±3nm
酶
乙酰胆碱酯酶（用pH8磷酸缓冲液溶解）
（3min吸光度变化值＞0.3，4℃冰箱保存不超过4天）
丁酰胆碱酯酶（用pH8磷酸缓冲液溶解）
3min吸光度变化值0.4—0.8之间
底物
硫代乙酰胆碱
（蒸馏水溶解，4℃冰箱保存不超过2周）
碘化硫代丁酰胆碱（BTCI）
（用pH8磷酸缓冲液溶解）
显色剂
二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）+碳酸氢钠
缓冲液溶液，4℃冰箱保存
二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）
缓冲液溶解
步骤
取表面干净的蔬菜或瓜果，叶菜类取叶片部分，瓜果取表皮带肉，剪成1cm左右见方碎片。
取样1g置于小烧杯内，加入5mL缓冲溶液，振荡1-2min，倒出并静置3-5分钟；
于小试管内分别加入2.5mL样本提取液、100uL酶液、100uL显色剂，摇匀后于37℃放置15min以上，加入100uL底物，应立即倒入仪器比色皿中，记录3min吸光度变化值。
取2g切碎的样本（非叶菜类取4g）放入提取瓶内，加入20mL缓冲液，振荡1-2min，倒出并静置3-5分钟；于小试管内分别加入50uL酶液、3mL样本提取液、50uL显色剂，于37-38℃下放置30min后分别加入50uL底物，倒入比色皿中，用仪器测定。
结果
抑制率≥50%：阳性
（阳性样品需要重复检测2次以上，若不合格,用色谱、质谱等进一步定性定量分析）
抑制率≥70%：阳性
（阳性样品应有2次以上的重复检测，若不合格,用色谱、质谱等进一步定性定量分析）
备注
1、当温度低于37℃时，酶反应速度放慢，加入酶液和显色剂后反应时间应该延长，延长时间的确定，应以空白对照测试3min吸光度变化值＞0.3方可进行下一步操作。
2、3min吸光度变化值＜0.3原因：①酶的活性不够；②酶的活性太低。
3、样品检测放置时间与空白的时间应该一致。
1、样品检测放置时间与空白的时间应该一致。
2、丁酰胆碱酯酶对乐果、甲基对硫磷、毒死蜱、二嗪磷等农药不太灵敏，检出浓度均在10mg/kg以上。
二、速测方法
2．结果计算
抑制率（%）=
抑制率：酶被抑制的程度
△Ac—对照组3min后与3min前吸光值之差;
△As—样本3min后与3min前吸光值之差。
注意事项
2011年首届全省农产品质量安全检测技术人员大比武现场操作评分细则（农残速测类）(2011年)中对取样部位、处理方法等内容进行详细的分项打分，这些打分项都是平时检测中需要注意的地方。
适用范围：蔬菜（葱蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇和番茄含有抑制酶的植物次生物质，易导致假阳性；叶绿素高的也会干扰，这两类可整株取样）；农药：有机磷和氨基甲酸酯类。
所有操作步骤顺序、加液量、处理时间一定要严格按标准执行。
建议使用同一批比色皿，不同批次的比色皿对结果可能存在影响。一批上机样品同时检测，共用一个对照。
检测前一定要检查酶液活性（3min吸光度变化值＞0.3）；酶液反复解冻最多不超过两次,否则会影响酶活性。
二、速测方法
如何看待农残快速测定方法
何为快速检测方法？
指检测速度相对较快、便于现场筛查的检测方法。其主要适合于定性和半定量测定，检测准确度相对