方法学评价试验-重复性试验(TP).pptx

方法学评价试验

——重复性试验方法学评价试验---重复性试验掌握：批内精密度评价的基本原理、实验步骤及统计方法。熟悉：重复性实验的注意事项和评价标准。了解：批间、日内及日间重复性实验的区别

方法学评价（evalution?of?methodology）是通过实验的途径客观评价实验方法及其试剂分析性能的重要手段。其基本内容是通过实验途径，测定并评价方法的精密度与准确度，在实验中测定的是不精密度与不准确度，不论精密度还是准确度，强调的都是误差，评价实验的过程就是对误差的测定。

灵敏度(sensitivity)是指检测系统可检测出的最低分析物浓度，或称检测限。特异度(specificity，SPE)，又称真阴性率(truenegativerate，TNR)，即实际无病按该诊断标准被正确地判为无病的百分比。它反映筛检试验确定非病人的能力。

重复性试验是在相同条件下，用同一方法、同一试剂和校准品、同一台仪器、在同一实验室由同一人操作对同一标本在尽可能短的时间内进行多次分析测定（一般为20次），以获得批内精密度实验数据。其结果反映各次测定结果间相互接近的程度。其目的在于评价或验证试验方法的随机误差或不精密度。包括批内重复性试验、日内重复性试验和日间重复性试验等。

批内重复性试验是将同一材料分成数份实验标本，在尽可能短的时间内平行测定20次；日内重复性试验是将同一材料分成数份实验标本，在1天内作5轮，每轮4次测定，获得20个测定数据；日间重复性试验是将同一材料分成20份实验标本，每天测定1份，连测20天。分别作统计处理即可测得候选方法的批内、日内和日间的随机误差。方法学评价试验---重复性试验

血清总蛋白质检测有何临床意义？

参考区间：65~85g/L血清总蛋白质检测有何临床意义？

血清总蛋白质检测有何临床意义？

蛋白质检测方法血清(浆)总蛋白(TP)测定重复的肽链结构酪氨酸和色氨酸残基对酚试剂反应或紫外吸收与某些染料特异结合的能力采用沉淀反应借助浊度或光折射原理测定电泳的迁移率大小

凯式定氮法（N）双缩脲法（肽键）酚试剂法（Lowry法）比浊法（沉淀）蛋白质检测方法早期用于酪氨酸和色氨酸的定量测定。该方法较双缩脲法反应灵敏100倍左右，检测范围最低可达5μg，通常为20~250μg，使用很广泛，但花费时间长（40~60分钟），干扰因素较多(硫酸铵；Tris缓冲液；甘氨酸，各种硫醇)，颜色深浅随不同蛋白质变化，较适合单一蛋白质测定。近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。（灵敏度好，费时，操作要严格计时）1883年建立，是经典的蛋白质测定方法。该法结果准确，精密度高，灵敏度低，适用于0.2~1.0mg氮测定，是蛋白质测定的参考方法，但由于操作复杂、费时（8~10h），影响因素较少（主要为非蛋白氮，但可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离），不适用于常规测定，目前多用于蛋白质的定值和校正其他方法。（测定准确，干扰少，费时太长）此法操作简便、准确、重复性好，干扰物质少(硫酸铵；Tris缓冲液；某些氨基酸)，在10~120g/L浓度范围内成良好的线形关系，批内CV值＜2%。其缺点是灵敏度较低(1~20mg)，不同蛋白质显色相似，但能满足临床要求，是目前临床测定蛋白质的一种首选方法。此法操作简便、灵敏度高，缺点是影响因素较多。一般用于测定尿液、脑脊液等蛋白质浓度较低的样品。

电泳法紫外分光光度法蛋白质检测方法此法操作简便、快速（5~10分钟），不消耗样品，测定后仍能回收使用，灵敏高，适用于50~100μg测定。但受蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量的影响，干扰因素也较多（各种嘌呤和嘧啶，各种核苷酸，可校正）。故适用于测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质，不适合血清等组成复杂的蛋白质测定，特别适用于柱层析洗脱液的快速连续检测。主要有醋酸纤维素薄膜电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳，等电聚焦电泳、双向电泳等。全自动电泳仪在临床的应用也逐渐增多，条带清晰，分辨效果好，能看到蛋白质全貌，但耗时较长，需要特殊仪器。

蛋白质检测方法

邻苯三酚红钼也可用于测定尿液、脑脊液蛋白质含量，既不粘附比色杯,又具有高灵敏度，已有用于自动化分析测定尿液蛋白质的试剂盒。还有测定Alb常用的染料甲基橙、溴甲酚紫(BCP)、溴甲酚绿（BCG）等，目前应用最广的是BCG。此法操作简便，灵敏度高，重复性好，适合自动分析；且球蛋白一般与阴离子染料不结合，无干扰作用。是清蛋白测定的常规方法，应用最广。血清(浆)总蛋白(TP)测定蛋白质检测方法

蛋白质检测方法血清(浆)总蛋白(TP)测定利用抗原抗体特异反应免疫比浊法、免疫扩散法、免疫沉淀法、免疫化学法等

蛋白质分子中的肽键在碱性条件下，与Cu2+产生稳定的紫红色络合物。与两分子尿素缩合后生成的双缩脲在碱性溶液中与Cu2+的反应相似，故称为双缩脲反应。络合物颜色